血栓症の発症分子機構の解明:血液凝固・線溶因子の組織内発現異常解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470209
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 齋藤 英彦 名古屋大学, 医学部, 教授 (20153819)
• 研究分担者: 山本 晃士 名古屋大学, 医学部, 医員 ; 小嶋 哲人 名古屋大学, 医学部, 教授 (40161913)
• キーワード: 血栓症 / 敗血症 / TFPI / TNF-α / IL-1 / 遺伝子発現量 / フイブリン沈着

研究概要

C57BL/6J系マウスにエンドトキシン(LPS)、TNF-αあるいはIL-1などの炎症性サイトカインを腹腔内投与し、適当な時間間隔(0〜24時間)をおいて各組織を摘出してtotal RNAの抽出とともにin situ hybriclization用にホルマリン固定した。competitve PCR(定量的RT-PCR法)を用いて、PCとTFPIのmRNA発現量を定量した結果、LPS投与4〜8時間後、TNF-α投与2〜4時間後に、いずれも約50%のPC mRNA発現低下を認めた。一方、IL-1を投与したマウスの肝臓、精巣においても同様の結果であったが、腎臓ではPC mRNA発現量の変化を認めず、IL-1の効果には組織特異性のあることが示唆された。また、LPSおよびTNF-α投与後のTFPI mRNA発現変化については、肺、心臓、腎臓、脂肪組織のいずれの組織においても、LPS投与4〜8時間後に約50%の発現低下を認め、TNF-α投与後の各組織についてもほぼ同様の結果であった。以上より、LPSおよび炎症性サイトカイン投与後には組織レベルでPC活性、TFPI活性が低下していると予測され、凝固亢進状態が惹起されていると考えられた。
LPS投与後の組織内フイブリン沈着の経時的変化について、免疫組織化学による実験を行った結果、投与後24時間以内にフイブリン沈着が認められたのは腎、副腎のみであり、肝、肺、心臓、脳を含むその他の組織ではフイブリンを検出できなかった。腎におけるフイブリン沈着は、皮質糸球体内の毛細血管ループおよび、皮質、髄質の尿細管周囲の微小血管内に認められたが、その沈着はLPS投与3〜4時間後をピークとして徐々に減少し、投与24時間後にはほとんど検出されなくなった。これと同様のフイブリン沈着の経時的変化は、副腎皮質の微小血管内においても認められた。これらの結果は組織におけるPCおよびTFPI mRNA発現の経時的変化(投与4時間後に発現が低下)とよく符合しており、両因子の発現変化と実際の血栓形成との間に密接な関わりがあることが示唆された。
エンドトキシンおよび炎症性サイトカイン投与による敗血症あるいは炎症惹起マウスモデルにおいては、PC、TFPIといった重要な血液抗凝固因子の発現が、組織、細胞レベルで低下しており、それによって組織における微小血栓形成、沈着が促進され、凝固亢進状態が招来されていると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Ishiguro,K.,Kadomatsu,K.,Saito,H., et al.: "Syndecan-4 deficiency impairs focal adhesion formation only under restricted conditions."J.Biol.Chem.. 275. 5249-5252 (2000)
• [文献書誌] Kunishima,S.,Tomiyama,Y.,Saito,H., et al.: "Homozygous Pro74→Arg Mutation in the Platelet Glycoprotein Ib β Gene Associated with Bernard-Soulier Syndorome."Thromb.Haemost.. 84. 112-117 (2000)
• [文献書誌] Sugihara,T.,Takahashi,I.,Saito,H., et al.: "Regulation of murine protein C gene expression in vivo : effect of tumor necrosis factor-α, inteleukin-1, and transforming growth factor-β."Nagoya J.Med.Sci.. 63. 25-39 (2000)
• [文献書誌] Ishiguro,K.,Kojima,T.Saito,H., et al.: "Complete antithrombin deficiency in mice results in embryonic lethality."J.Clin.Invest.. 106. 873-878 (2000)
• [文献書誌] Nakayama,T.,Matsushita,T.,Saito,H., et al.: "Short report : A case of purpura fulminans is caused by homozygous delta8857 mutation (protein C-nagoya) and successfully treated with activated protein C concentrate."Br.J.Haematol.. 110. 727-730 (2000)
• [文献書誌] Shimokawa T,Yamamoto K,Saito,H., et al.: "Down-regulation of murine tissue factor pathway inhibitor mRNA by endotoxin and tumor necrosis factor-alpha In vitro and In vivo."Thromb.Res.. 100. 211-221 (2000)