Chkチロシンキナーゼ過剰発現による血液細胞多核化現象の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470212
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 山口 直人 千葉大学, 薬学部, 教授 (00166620)
• キーワード: Src型チロシンキナーゼ / Csk / Csk homologous kinase (Chk) / 多核化 / 細胞内局在 / 細胞増殖 / 染色体 / チロシンリン酸化

研究概要

Src型チロシンキナーゼは、増殖因子などの刺激によって活性上昇を起こし、C-terminal Src kinase(Csk)により抑制的に調節される。我々は、Chk(Csk homologous kinase)とCskとのファミリー形成、血液細胞におけるCskとChkの共発現、トロンビン刺激血小板におけるChkによるSrc型キナーゼLyn選択的抑制機構を明らかにしてきた。また、Chkが、フィブロネクチン-VLA5インテグリン依存性血液細胞伸展に必要なLynの活性を選択的に制御することを示した。
本研究では、Src型キナーゼおよびChk・Cskの細胞内存在位置が機能に重要な役割をもつことを考慮し、血液系細胞において、Src型キナーゼの細胞内局在を調べた。Src型キナーゼLynとChkが細胞膜の他に、核および染色体に存在しており、しかもchromosome scaffoldに存在して染色体と強く会合していた。また、分裂期紡錘糸にも分布していた。Chk過剰発現を企てたところ、増殖の遅延を伴う多核化を誘発した。Chk過剰発現により、染色体と紡錘糸に会合するチロシンリン酸化蛋白質の変動が観察された。一過性大量発現のできる腎上皮細胞株COS-1細胞にChkを発現させたところ、細胞質のみならず核にも一部存在することが分かった。ChkのSH2領域欠失(Chk△SH2)変異体を作製してCOS-1細胞に発現させて局在を調べたところ、大部分のChk△SH2は核に限局していた。Chk△SH2の核内での発現は、多形核分葉核化・多核化を高頻度に誘導し、細胞増殖を抑制した。したがって、この多核化は、Chk過剰発現した血液系細胞株で観察されたものと類似しているものと考えられ、Src型チロシンキナーゼLynの細胞核分裂と染色体の動態への役割が推察される。

研究成果

• [文献書誌] Tada J et al.: "A common signaling pathway via Syk and Lyn tyrosine kinases generated from capping of the sialomucins CD34 and CD43 in immature hematopoietic cells."Blood. 93. 3723-3735 (1999)
• [文献書誌] Mera A et al.: "Induction of cell shape changes through activation of the interleukin-3 common beta-chain receptor by the RON receptor-type tyrosine kinase."Journal of Biological Chemistry. 274. 15766-15774 (1999)
• [文献書誌] El-Shazly A et al.: "Novel association of the Src family kinases, Hck and c-Fgr, with CCR3 receptor stimulation : a possible mechanism for eotaxin-induced human eosinophil chemotaxis."Biochemical and Biophysical Research Communications. 264. 163-170 (1999)
• [文献書誌] Takikawa M et al.: "Suppression of GD1α ganglioside-mediated tumor metastasis by lyposomalized WHW-peptide."FEBS Letters. 466. 381-384 (2000)
• [文献書誌] Yamaguchi N et al.: "Overexpression of the Csk homologous kinase (Chk tyrosine kinase) induces multinucleation : A possible role for chromosome-associated Chk in chromosome dynamics."Journal of Cell Science. (In press). (2001)