変異ウイルスを基軸とした悪性脳腫瘍に対する複合的遺伝子治療法の開発

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470298
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 矢崎 貴仁 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (80200484)
• 研究分担者: 篠田 淳男 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60306719) ; 池田 圭朗 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10222879) ; 河瀬 斌 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (40095592) ; 須川 誠 中外製薬(株), 主任研究員
• キーワード: 悪性脳腫瘍 / 単純ヘルペスウイルス / 浸潤抑制因子 / 抗ウイルス免疫 / 特異的プロモータ / Musashi-1

研究概要

本年度は、複製型ヘルペスベクターを用いたウイルス療法において、これまで行ってきた浸潤抑制蛋白を同時に発現させる方法を動物実験にて検証するとともにその安全性の確認を行い、さらにウイルスを投与後に腫瘍内で抗ウイルス免疫によって攻撃され不活化することを抑制することによって、抗腫瘍効果の増大を図る研究を行った。さらに、ウイルスの腫瘍特異性を高めるため、悪性グリオーマ特異抗原として、Musashi-1に着目しそのプロモーター活性を解析した。(1)TIMP2発現HSVベクターを高濃度に濃縮し、生存解析上十分な治療効果を示す濃度にて、正常マウス脳内に注入したのち、各臓器別にウイルスによる傷害が起こっていないかどうかを、組織および免疫化学的に解析したところ、明かな傷害は認められなかった。(2)患者血清により治療用ウイルスが不活化されるかどうかを解析したところ、抗HSV抗体を有する患者で有意に不活化され、その期間は殆ど24時間以内であった。(3)化学療法(MCNU+VCN)中の患者血清では、抗ウイルス活性は有意に抑制されていた。(4)抗ウイルス免疫を抑制するため、シクロホスファミドをウイルスと同時に腹腔内投与したところ、ウイルスの不活化が有意に抑制され、動物実験で抗腫瘍効果の有意な増加を認めた。(5)以上よりウイルス療法を悪性グリオーマの化学療法と同調させることで、より高い治療効果が得られることが予想された。(6)Musashi-1プロモータ下流にLacZを挿入し、各種グリオーマ細胞株に遺伝子導入したところ、他の細胞株と比べてグリオーマで有意なプロモータ活性をしめした。(7)このことは、Musashi-1プロモータによりウイルス複製を制御させることによって、より特異性の高い治療用ベクターが開発出来ることを示唆している。

研究成果

• [文献書誌] Oyama M.,Yazaki T. et al: "Application of conditionanlly replicating herpes vector for gene therapy treatment of urologic neoplasms."Mol Urol.. 4(2). 83-87 (2000)
• [文献書誌] Hoshi M.,Yazaki T. et al: "Antitumor effects of defective herpes simplex virus-mediated transfer of the TIMP-2 gene in malignant glioma U87 in vitro : consequences for an anticancer gene therapy."Cancer Gene Ther.. 7(5). 799-805 (2000)
• [文献書誌] Oyama M.,Yazaki T. et al: "Intravesical and intravenous therapy of human bladder cancer by the herpes vector G207."Hum Gene Ther.. 11(12). 1683-16* (2000)
• [文献書誌] Oyama M.,Yazaki T. et al: "Experimental therapy for bladder cancers using conditionally-replicating herpes vector."Hum Cell. 13. 34 (2000)
• [文献書誌] Oyama M.,Yazaki T. et al: "Oncolytic viral therapy for human prostate cancer with attenuated, replication-competent herpes simplex virus type 1 mutant G207."Japan J.Cancer Res.. 91. 1339-1344 (2000)
• [文献書誌] Oyama M.,Yazaki T. et al: "Treatment of human renal cell carcinomas by G207, a replication-competent multimutated herpes simplex virus 1."J Urol. (in press). (2001)