| 研究課題/領域番号 |
11470429
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
吉田 廣 筑波大学, 臨床医学系, 教授 (80014330)
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| 研究分担者 |
遊佐 浩 筑波大学, 臨床医学系, 助手 (40292560)
鬼澤 浩司郎 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (60194578)
石井 哲郎 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (20111370)
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| キーワード | A170 / zeta interacting protein(ZIP) / gene targetting / oxidative stress / stress response |
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| 研究概要 |
本実験はA170遺伝子ノックアウトマウスの製作をおこない、口腔組織の疾患に対する応答の解析を行うことによって、口腔癌に対する宿主側の防御系のメカニズムの一つを解明するものである。
本年度は、ノックアウトマウスの構築を開始するとともに、ノックアウトマウスの構築まで時間がかかるため、その間の時間を利用して、マウス完成後を想定したストレス応答実験、腫瘍細胞における発現などをA170以外の酸化ストレスタンパク質でおこなった。
ノックアウトマウスの構築としては、BAC/129Svマウスゲノムライブラリー中より、ハイブリダイゼーション法をもちいてマウス遺伝子A170のDNAをスクリーニングし、上流の配列を検索した。結果として3つのポジティブクローンをひろった。さらにスクリーニングで得られたフラグメントをシーケンスし、遺伝子構造の解析を開始した。
一方、ノックアウトマウスのストレス応答実験としては、酸化ストレス刺激としてカイニン酸を利用してラット脳内におけるA170の発現の変化を検討しストレス誘導の効果をみた。また、酸化ストレスタンパク質として、A170と同様に酸化ストレス誘導のあるPrx I,HO-1などの脳内の発現もしらべた。さらに、酸化ストレスが口腔腫瘍と関連することを確認するため、ヒト腫瘍組織内におけるPrx Iの発現を見た。
以上の知見をもとに、次年度以降のノックアウトマウスの構築、および病態の解析の基礎とする。
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