MAbによる生理活性配糖体の簡易検出・単離法及び小型化抗体遺伝子に関する研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470470
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 正山 征洋 九州大学, 薬学研究科, 教授 (70037604)
• 研究分担者: 田中 宏幸 九州大学, 薬学研究科, 助手 (30253470)
• キーワード: モノクローナル抗体 / 活性配糖体 / 高感度アッセイ系 / ウエスタンブロッティング / アフィニティークロマト / 小型化抗体遺伝子 / 発現

研究概要

本研究のターゲットである配糖体類に関してはポリクローナル抗体の成功例はあるがモノクローナル抗体(MAb)に関してはほとんど見られてないのが現状である。これは一般に抗原中のハプテン数の確定が困難であったため、容易に適切な抗原を作成することが出来なかったことによるものと推察される。我々は世界に先駆けてMALDI-MSによりハプテン数を容易に確定する手法を確立し、この結果当研究室では確実な免疫化が成されるようになった。本研究では人参サポニンの1つであるジンセノサイドRb1やナス科植物のソラソジン配糖体、甘草のグリチルリチン、サフランのクロシン等に対するMAbを作成し、それらを用いた再現性良好で高感度のアッセイ系を構築した。またアフィニティークロマトを作製し、ワンステップの単離を行った。一方抗ソラマルジンMAb産生ハイブリドーマから常法により小型化抗体(scFV)遺伝子を作製し、大腸菌に形質転換し、scFVを100mg/l培地発現する系を開発した。

研究成果

• [文献書誌] N. Fukuda et al: "Western blotting for ginseng saponins,Ginsenosides using anti-ginseno side Rb1 monoclonal antibody"Biol. Pharm. Bull.. 22. 219-220 (1999)
• [文献書誌] H. Tanaka et al: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component,ginsenoside Rb1 and its characterization"Cytotechnology. 29. 115-120 (1999)
• [文献書誌] W. Putakun et al: "Rapid separation of solasodine glycoside by an immunoaffinity colun using anti-solamorgine monoclonal antibody"Cytotechnology. 31. 151-156 (1999)
• [文献書誌] H. Tanaka et al: "Western blotting of steroidal alkaloid glycosides using monoclonal antibody against solamargine"J. Lip. Chrom. Rel. Technol.. 22(10). 1503-1512 (1999)
• [文献書誌] L. Xuan et al: "Preparation of monoclonal antibody against crocin and its characterization"Cytotechnology. 29. 65-70 (1999)
• [文献書誌] S. J. Shan et al: "Western blotting for the immunostaining detection of glucuronides of glycyrrhetic acid using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody"Biol. Pharm. Bull.. 22(2). 221-223 (1999)
• [文献書誌] 正山征洋共著: "21世紀の生薬・漢方製剤"繊維社企画出版. 432 (1999)
• [文献書誌] 正山征洋共著: "薬用植物栽培と品質評価 part8"薬事日報社. 59 (1999)