2001 年度実績報告書

MAbによる生理活性配糖体の簡易検出・単離法及び小型化抗体遺伝子に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	11470470
研究機関	九州大学
研究代表者	正山征洋九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)
研究分担者	田中宏幸九州大学, 薬学研究院, 助教授 (30253470)
キーワード	モノクローナル抗体 / 薬理活性配糖体 / イースタンブロテイング / アフィニテイーカラム / ワンステップ単離 / scFV遺伝子 / トランスジェニック植物 / 育種
研究概要	本研究では生理活性を持つ生薬由来配糖体(ニンジンのジンセノシド、甘草のグリチルリチン、大黄のセンノシド類、柴胡のサイコサポニン類、サフランのクロセチン配糖体)をターゲットとして、それらに対するモノクローナル抗体(MAb)を作成してきた。それらを用いて高感度で特異性の高いアッセイ法を確立してきた。また、ソラソジン配糖体に対する抗体産生ハイブリドーマから小型化抗体遺伝子を作成し、小型化抗体(scFV)の作成に成功した。ジンセノシド(G)に関してはGRb1,GRg1それぞれに対するMAbを作成し、新免疫染色法としてイースタンブロテイング法を確立した。本法により坑GRb1,GRg1MAbを用いた2重染色に成功した。本法によるとGRb1系統のGは青色、GRg1系統はピンク系統に染色される。従って発色とRf値によりGの構造を容易に類推することを可能にした。その他の配糖体についても同様な開発に成功した。 MAbを装着したアフィニテイーカラムの作成に成功した。坑GRb1MAbの場合、ニンジンエキスをカラムに付し、洗浄液、溶離液の順に添加すると、洗浄液によりGRb1以外の成分と過剰のGRb1が溶出する.次に溶離液によってGRb1のみが溶出し、ワンステップ単離に成功した。また、洗浄液中のG類はカラムを繰り返すことによりGRb1とGRcを分離可能なことが明らかとなった。 scFV遺伝子をハイブリドーマからmRNAを抽出し、転写酵素でcDNAとし、プライマーによりMAbの可変部分、VH, VL遺伝子をクローニングした。両者をリンカーで結合し、プラスミッドに挿入し、発現ベクターに組み換え、大腸菌でscFVタンパクを発現した。本遺伝子をソラソジン配糖体を産生するナス科植物へ導入し、ソラソジン配糖体の高含有株(約3倍)を作出した.

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] S.Shan et al.: "Enzyme-linked immmunosorbent assay for glycylrrhizin using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody and an eastern blotting technique"AnaL.Chem.. 73(24). 5784-5790 (2001)
[文献書誌] O.Morinata et al.: "Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA"Analyst. 126. 1372-1376 (2001)
[文献書誌] N.Fukuda: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component, ginsenoside Rg1 and its characterization"Cytotechnology. 34. 197-204 (2000)
[文献書誌] K.Watanabe et al.: "Cross-reactivity of various tetrahydrocannabinol metabolites with a monoclonal antibody against tetrahydrocannabinolic acid"J.Helth Sci.. 46(4). 310-313 (2000)
[文献書誌] O.Morinaga et al.: "Production of monoclonal antibody against a major purgative componet. sennoside B, their charactrization and ELISA"Analyst. 125. 1109-1113 (2000)
[文献書誌] N.Fukuda et al.: "Isolation of pharmacologically active saponin geinsenoside Rb1 from ginseng by immunoaffinity column chromatography"J.Nat.Prod.. 63(2). 283-285 (2000)
[文献書誌] S.Shan et al.: "ELISA, western blotting, immunocytolocalozation and immunoaffinity column for naturally occurring bioactive compounds using MAb"J.Food Drug Analysis. 11 (2000)

2001 年度 実績報告書

MAbによる生理活性配糖体の簡易検出・単離法及び小型化抗体遺伝子に関する研究

研究代表者

正山 征洋 九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)

研究成果

[文献書誌] S.Shan et al.: "Enzyme-linked immmunosorbent assay for glycylrrhizin using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody and an eastern blotting technique"AnaL.Chem.. 73(24). 5784-5790 (2001)

[文献書誌] O.Morinata et al.: "Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA"Analyst. 126. 1372-1376 (2001)

[文献書誌] N.Fukuda: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component, ginsenoside Rg1 and its characterization"Cytotechnology. 34. 197-204 (2000)

[文献書誌] K.Watanabe et al.: "Cross-reactivity of various tetrahydrocannabinol metabolites with a monoclonal antibody against tetrahydrocannabinolic acid"J.Helth Sci.. 46(4). 310-313 (2000)

[文献書誌] O.Morinaga et al.: "Production of monoclonal antibody against a major purgative componet. sennoside B, their charactrization and ELISA"Analyst. 125. 1109-1113 (2000)

[文献書誌] N.Fukuda et al.: "Isolation of pharmacologically active saponin geinsenoside Rb1 from ginseng by immunoaffinity column chromatography"J.Nat.Prod.. 63(2). 283-285 (2000)

[文献書誌] S.Shan et al.: "ELISA, western blotting, immunocytolocalozation and immunoaffinity column for naturally occurring bioactive compounds using MAb"J.Food Drug Analysis. 11 (2000)

2001 年度実績報告書

正山征洋九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)