情報伝達機構の解明を目指した骨形成因子(BMP)とそのレセプターの構造解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11470475
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 小林 祐次 大阪大学, 薬学研究科, 教授 (20127228)
• 研究分担者: 吉田 卓也 大阪大学, 薬学研究科, 助手 (00294116)
• キーワード: BMP / 立体構造解析 / レセプター / 複合体 / NMR

研究概要

BMPについて、大腸菌を用いた大量発現系を構築し、ジスフィド結合を結成する条件を検討した結果、以前は得ることが難しかった天然型に巻き戻ったBMPが入手可能になった。続いて、構造解析に有利であると考えられる溶解度が高い条件を、動的光散乱法、沈降平衡法などを用いて検討した。また同時に、BMPレセプターとの複合体を形成する条件を同様の方法を用いて検討した。現在その最適化を行うとともに、複合体の構造解析に着手している。しかし、複合体の構造解析においては様々な困難が予想され、場合によっては、部位特異的変異体などを用いて構造解析に最適な物性をもつ複合体を調整する必要が生じると考えられる。その際にはあらかじめ相互作用部位を推定しておくことが不可欠である。そこでBMPレセプターのリガンド認識部位について、その立体構造に基づき系統的に部位特異的変異体を作成しBMPとの親和性を表面プラズモンセンサー、沈降平衡法、およびNMRによって定量的に解析した。その結果、認識・結合に重要なアミノ酸残基を特定できた。

研究成果

• [文献書誌] H.KASHIMOTI: "Backbone NMR assignment and secondary structure of ribosome Recycling(RRF) from Pscudomonas aeruginosa"Journal of Biomolecular NMR. 15. 341-342 (1999)
• [文献書誌] J.Hasegawa: "Stabilization of Pseudomonas aeruginosa Cytochorome c551 by Systematic ,Amino Acid Substitution Based on the structure of Thermophilic Hidrogenobacter thermophilus Cytochorome c552"Journal of Biological Chemistry. 274. 37533-37537 (1999)
• [文献書誌] Andre Aumelas: "The chimeric peptide[Lys(-2)-Arg(-1)]-sarafotoxin-S6b, composed of the endothilin pro-sequence and sarafotoxin retains the salt-bridge staple between Arg(-1) and Asp8 previously observed in [Lys(-2)-Arg(-1)]-endothelin"European Journal of Biochemistry. 266. 977-985 (1999)
• [文献書誌] K.Ogawa: "Conformation analysis of eel Calcitonin Comparison with the conformation of Elcatonin"European Journal of Biochemistry. 257. 3331-3336 (1998)
• [文献書誌] H.Tamaoki: "Folding Motifs Induce and Stabilized by Distinct Cystine Frameworks"Protein Engineering. 11. 649-659 (1998)
• [文献書誌] S.Matusda: "The Role of Calcium-binding Sites in S-modulin Function"Journal of Biological Chemistry. 273. 20223-20227 (1998)
• [文献書誌] Y.Kobayashi et al.: "ENCYCLOPEDIA OF MOLECULAR BIOLOGY"Jphn Wiley & Sons,Inc.(分担). 14 (1999)