| 研究課題/領域番号 |
11480228
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経解剖学・神経病理学
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| 研究機関 | 関西医科大学 |
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研究代表者 |
杉本 哲夫 関西医科大学, 医学部, 教授 (90144352)
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| 研究分担者 |
加瀬 政彦 関西医科大学, 医学部, 助手 (10309221)
宝谷 剛志 関西医科大学, 医学部, 講師 (60241163)
大石 仁 関西医科大学, 医学部, 講師 (00252461)
佐久間 覚 関西医科大学, 医学部, 助手 (70309227)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| キーワード | 遺伝子 / マウス / ノシセプチン / 学習・記憶機構 / イオンチャネル / cDNAサブトラクション法 |
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| 研究概要 |
1.ノシセプチン受容体遺伝子変異マウス(以下変異マウスと略す)に特異的に発現するノシセプチン関連遺伝子の単離
第1に、変異マウスのホモ、ヘテロ各接合体から得た脳トータルRNAをもとにRT-PCRを実施した。ついでPCRセレクト法に従いcDNAサブトラクションとクローニングを行なった。新規遺伝子としては脳に特異的に局在するリン酸化酵素のマウスホモログと考えられる遺伝子を同定した。今後、海馬・大脳皮質等の学習記憶関連脳領域にて、この発現産物がいかに局在するかを特定する作業を必要とする。
第2に、アトラスアレイ法を用いて変異マウスのホモ接合体に特異的に発現増強ないし発現減弱する遺伝子を検出した。現在までに、upregulateされる遺伝子、downregulateされる遺伝子各数個ずつの候補遺伝子を得た。この結果について、該当遺伝子の脳内発現の特徴やホモ接合体固有の遺伝子発現変化か否かといった点を厳密に検証する作業をすすめながら、ノシセプチン関連遺伝子を隈なく明らかにする。
2.変異マウス脳・脊髄のノシセプチンおよび同受容体分布の解析
ベータガラクトシダーゼ反応による発色法とin situハイブリダイゼーション法によって、変異マウスホモ接合体に特異的に検出される標記物質の分布を明らかにした。
3.マウス歯状回顆粒細胞に対するノシセプチンの作用
急性単離した標記細胞においてパッチクランプ法を用いて膜イオンチャネルと電流変化の特性を解析した。その結果、(1)標記細胞には、今まで末梢神経系細胞で報告されていたカルシウムスパークが存在すること、(2)ノシセプチンがカルシウムスパークを増強すること、(3)その機構はリアノジン受容体の増強変化を介していること、(4)ノシセプチンが一過性外向き電流を増加することで細胞の興奮を抑制すること、を強く示唆するデータを得た。
4.マウス歯状回顆粒細胞の構造特徴
変異マウス歯状回顆粒細胞を光顕的および電顕的に解析した.いずれの方法においても現在までのところ,変異マウスの歯状回顆粒細胞は野生型対照と比べて著変を認めなかった.ただひとつ,カルシウム結合タンパクの免疫活性産物に関しては著しい変化を認めた.この成果は学習・記憶のシナプス機構を分析するのに重要と考えられる.
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