| 研究課題/領域番号 |
11480252
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
安斉 順一 東北大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (40159520)
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| 研究分担者 |
星 友典 東北大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (50302170)
鈴木 巌 東北大学, 大学院・薬学研究科, 講師 (30226493)
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| キーワード | バイオセンサー / 分子配列 / 配列制御 / 酵素薄膜 / 超薄膜 |
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| 研究概要 |
レクチンと糖鎖標識酵素を用いた固定化酵素膜の製造条件を検討した。糖鎖修飾酵素を調製するために、活性化マンノース試薬が有効であることがわかった。酵素としてグルコースオキシダーゼおよびラクテートオキシダーゼを用いてマンノース試薬を反応させると、1つの酵素分子対して5〜10分子のマンノースが導入できることを見出した。この反応の条件を系統的に検討し、反応時間や反応温度、試薬の濃度などに関して最適条件を確立することができた。また、反応物の処理と精製法についても最適化を実施した。次に、調製したマンノース標識酵素とレクチンを用いて固定化酵素膜の分子配列制御を実現するために、固定化条件の最適化を実施した。その結果、固定化担体をレクチンと標識酵素の溶液に交互に浸す操作をくり返すことにより、酵素薄膜を調製できることが明らかになった。その際に用いるレクチンおよび標識酵素溶液の濃度は、0.1-0.01mg/ml程度が好ましいことがわかった。また、処理時間は20-30分程度で充分であった。色素修飾レクチンを用いて吸収スペクトルにより酵素薄膜の構造を検討したところ、1回の固定化操作によりレクチンおよび標識酵素は単分子層程度あるいはそれ以下の被覆率で薄膜を形成していることが判明した。また、これらの固定化操作の処理時間はレクチンや酵素の膜内での分子配列に影響を与えることがわかり、処理時間や処理温度を系統的に検討する必要があることが示唆された。
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