| 研究課題/領域番号 |
11556016
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
大川 秀郎 神戸大学, 農学部, 教授 (90233048)
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| 研究分担者 |
川田 充康 大塚化学(株), 鳴門研究所, 主任研究員
片桐 昌直 大阪教育大学, 教育学部, 助教授 (00185802)
中田 昌伸 神戸大学, 農学部, 教授 (40031190)
三宅 司郎 (株)バイオ・アプライド・システムズ, 開発・営業部長(研究職)
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| キーワード | 外因性内分泌撹乱物質 / ビスフェノールA / シメトリン / モノクローナル抗体 / ELISA / scFv |
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| 研究概要 |
1.外因性内分泌攪乱物質のハプテン、抗原(免疫原)の作製
ビスフェノールA.PCB、除草剤シメトリン、シマジン、トリフルラリンとアラクロールなどのハプテン、抗原(免疫原)などを合成した。
2.モノクローナル抗体の調製とELISAの確立
免疫原をマウスに免疫した後、抗体産生細胞をスクリーニングすることにより、ビスフェノールA.シメトリン、シマジン、トリフルラリン、アラクロールなどに特異的なモノクローナル抗体を調製して、それらを用いたELISAの測定条件を確立した。
3.モノクローナル抗体可変領域scFvの調製
モノクローナル抗体産生細胞からmRNAを調製して、それからcDNAを取得するなどを経てscFVcDNAを調製して、それらを大腸菌に発現することによりビスフェノールA.シメトリンに対するscFvを調製した。ビスフェノールAに関しては4種のモノクローナル抗体産生細胞からおのおの相当するscFvを調製し、また、シメトリンについては1種のscFvについて長鎖と短鎖を入れ換えた2種のscFvを作出した。いずれのscFvもELISAにおいて相当するモノクローナル抗体と同等の反応性を示した。
また、シメトリンscFvでは長鎖と短鎖を入れ換えることにより、反応性が2倍変わることが判明した。
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