| 研究課題/領域番号 |
11556016
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
大川 秀郎 神戸大学, 遺伝子実験センター, 教授 (90233048)
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| 研究分担者 |
川田 充康 大塚化学(株), 鳴門研究所, 主任研究員
片桐 昌直 大阪教育大学, 教育学部, 助教授 (00185802)
中田 昌伸 神戸大学, 農学部, 教授 (40031190)
三宅 司郎 (株)バイオ・アプライド・システムズ, 開発・営業部長(研究員)
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| キーワード | 外因性内分泌攪乱物質 / ビスフェノールA / ノニルフェノール / モノクローナル抗体 / ELISA / scFv / PCB / アフィニティーカラム |
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| 研究概要 |
1.外因性内分泌攪乱化学物質のハプテン、抗原(免疫原)の作製
ビスフェノールA.ノニルフェノールPCB、などのハプテン、抗原(免疫原)などを合成し、免疫原をマウスに免疫して抗体を調製し、また、抗原をELISAの確立に供した。
2.モノクローナル抗体の調製とELISAの確立
免疫原を免疫したマウスから、抗体産生細胞をスクリーニングすることにより、ビスフェノールA.ノニルフェノール、PCBなどに特異的なモノクローナル抗体産生細胞を得、それから調製したモノクローナル抗体を用いたELISAの測定条件を確立した。
とりわけ、PCBに対するモノクローナル抗体はELISAで高感度であった。
3.モノクローナル抗体一本鎖可変領域scFvの調製
モノクローナル抗体産生細胞からmRNAを調製して、それからcDNAを取得するなどを経て一本鎖scFvcのDNAを調製して、それらを大腸菌に発現することによりビスフェノールA.ノニルフェノールに対するscFvを調製した。ビスフェノールAに関しては4種のモノクローナル抗体産生細胞からおのおの相当するscFvを調製し、また、ノニルフェノールについては2種のscFvを調製した。いずれのscFvもELISAにおいて相当するモノクローナル抗体と同等の反応性を示した。また、ビスフェノールAのscFvを組換え大腸菌の培養により大量に調製して、アフィニティーカラムの開発に供した。それを用いて、試料前処理用アフィニティーカラムの基本を確立した。
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