| 研究課題/領域番号 |
11556058
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
高橋 英司 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (50183439)
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| 研究分担者 |
中山 裕之 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (40155891)
辻本 元 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (60163804)
甲斐 知恵子 東京大学, 医科学研究所, 教授 (10167330)
上田 進 日本生物科学研究所, 所長(研究職) (00072463)
加藤 篤 国立感染症研究所, ウイルス製剤部, 室長(研究職) (40152699)
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| キーワード | サイトカイン / イヌ / センダイウイルス / GM-CSF / IL-6 / IL-8 / アジュバント |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、組換えセンダイウイルス発現サイトカインを用いることにより、自然宿主でのサイトカインネットワークの基礎的研究を行い、その基盤の上に、蛋白あるいはウイルスベクターの投与による有効なサイトカインアジュバント免疫誘導法を開発・確立することである。
今年度は以下の成果を得た。
イヌIFNγのセンダイウイルスによる発現を検討した。すなわちConA刺激したイヌの脾細胞からRNAを抽出し、イヌIFNγのORFをRT-PCRでクローニングした。このクローンからイヌIFNγのORFをセンダイウイルスの転写開始シグナルを含むプライマーを用いたPCRで増殖し、センダイウイルスベクターに挿入した。このプラスミドとN,P,L各蛋白発現プラスミドであるpGEM-N、pGEM-、pGEM-LをあらかじめT7 RNA polymerase発現組換えワクチニアウイルスを感染させておいたLLCMK2細胞にco-transfectした。
co-transfectしたLLCMK2細胞からイヌIFNγ組換えセンダイウイルスが得られた。この組換えウイルスを発育鶏卵に接種し漿尿液を回収し、抗血清を用いてウエスターンブロッティングを行ったところ、おおよそヒトと同じ大きさのイヌIFNγ特異的なバンドが検出された。またこの組換えセンダイウイルス発現イヌIFNγのウイルス増殖抑制作用を調べたところ、その活性を有していることが確認された。
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