| 研究概要 |
本研究は,植物細胞の分化・成長に係わると推定される糖蛋白質糖鎖の生理機能の詳細を解明するとともに,それら糖鎖のシグナリング機能を利用した植物成長コントロール技術開発の基礎を確立することを目的とする。
本年度は,トマト,タバコ培養細胞からエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼを,昨年度我々が確立した新規アフィニティークロマトにより完全精製することに成功した,現在それら酵素のリジルエンドペプチダーゼ消化物から精製したペプチドのアミノ酸配列の解析を行っている。これらのアミノ酸配列情報から,遺伝子クローニングに着手する予定である。
一方,アラビドプシス由来に酵素については,遺伝子クローニングがほぼ完了し,大腸菌での大量発現系の検討を行っている。
また,昨年度,カボチャ子葉を試料として,エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼの細胞内分布解析を行い,本酵素が細胞質画分に存在することを明らかにしているので,今年度は,カボチャ子葉由来のエンドグリコシダーゼの部分精製を行い,詳細な基質特異性解析を行った。その結果,本酵素も,既に我々が明らかにしているその他の植物エンドグリコシダーゼと同様,ハイマンノース型糖鎖を効率よく加水分解することが明らかとなった。更に,カボチャ実生中における遊離N-グリカンの分布解析を行った結果,遊離N-グリカンは子葉部,胚軸,根部いずれからも同程度の濃度検出され,それらはMan9-7GlcNAc1の構造を有していた.カボチャ種子中には,ハイマンノース型糖鎖を有する糖蛋白質は殆ど存在しないことから,これら遊離糖鎖は貯蔵糖蛋白質から誘導されたものでは無いことが明らかとなった。
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