アニオン性薬物トランスポーターのクローニングと薬物動態解析への応用

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11557005
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 杏林大学
• 研究代表者: 関根 孝司 杏林大学, 医学部, 助手 (50255402)
• 研究分担者: 武田 理夫 杏林大学, 医学部, 講師 (40255401) ; 金井 好克 杏林大学, 医学部, 助教授 (60204533) ; 遠藤 仁 杏林大学, 医学部, 教授 (20101115) ; 細山田 真 杏林大学, 医学部, 助手 (00291659) ; 車 碩鎬 杏林大学, 医学部, 助手 (50276200)
• キーワード: organic anion transporter / drug transporter / pharmacokinetics / kidney / liver / brain / placenta / cloning

研究概要

本研究課題の初年度である平成11年度は、(1)新規OATアイソフォームの単離、(2)これまで同定されたOATisoformのヒト型ホモログの単離および安定発現培養細胞の構築、の二つを重点的におこなった。
(1)新規OATアイソフォームの単離
既に得られているOAT1-3の配列を基にESTdatabaseを探索した結果、新規配列ESTcloneを得た。それをプローブとして、ヒト腎臓および胎盤cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、550アミノ酸をコードする新規クローンを単離した。このクローンは、estrone sulfate、dehydroepiandrosterone sulfate、ochratoxin A、PAHを細胞外Naに非依存的に輸送し、hOAT4と名付けた。hOAT4は、OAT1-3に対してアミノ酸レベルで38-44%の相同性を有していた。hOAT4mRNAは、ヒト腎臓および胎盤に高発現をしており、特に硫酸抱合体に高い親和性を示した。
〈2)OATisoformのヒト型ホモログの単離および安定発現培養細胞の構築
ratOAT2およびOAT3のcDNAを用いて、ヒト肝臓および腎臓cDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、human OAT2およびhOAT3のcDNAを単離した。また、アフリカ爪ガエル卵母細胞発現系を用いて、これらのヒト型ホモログが有機アニオン輸送能を示すことを明らかにした.その後に、hOAT1,2,3および4のcDNAを哺乳類発現ベクターに組み換えて、マウス近位尿細管S2由来細胞にtransfectして、安定発現細胞株を得た。現在これらのhOAT発現培養細胞を用いて、ヒトOATホモログの機能を詳細に解析中である。

研究成果

• [文献書誌] Cha SH,Sekine T,et al: "Molecular cloning and characterization of multispecific organic anion transporter 4 expressed in the placenta."J Biol Chem. 275. 4507-4512 (2000)
• [文献書誌] Nakajima N,Sekine T,Cha SH ,et al: "Developmental changes in multispecific organic anion transporter 1(OST1)expression in the kidney."Kidney Int. (in press). (1999)
• [文献書誌] Sekine T,Cha SH,et at: "Molecular biolongy of multispecific organic anion transporter familiy (OAT family).(REVIEW ARTICLE)"Clin Exp Nephrol. 3. 237-243 (1999)
• [文献書誌] Kusuhara H,Sekine T,et al: "Molecular cloning and characterization of a new multispeccific organic anion transporter from rat brain."J Biol Chem. 274. 13675-13680 (1999)
• [文献書誌] Apiwattanakul N,Sekine T,et al: "Transport properties of nonsteroidal anti-inflammatory drugs by organic ajion transporter 1 expressed in Xenopus laevis oosytes."Mol Pharmacol. 55. 847-854 (1999)
• [文献書誌] Jariyamat S,Sekine T,et al: "The interaction and transport of β-lactam antibiotics with the cloned rat renal orgnic anion transporter 1(OAT1)"J.Pharamacol.Exp.Ther.. 290. 672-677 (1999)