酵母の色彩変化による機能的遺伝子診断法の開発と実用化

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11557018
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 守内 哲也 北海道大学, 医学部, 教授 (20174394)
• 研究分担者: 浜田 淳一 北海道大学, 医学部, 助教授 (50192703)
• キーワード: AIE-75 / 酵母 / 遺伝子診断 / ADE2

研究概要

小児の自己免疫性腸炎(AIE)の自己抗原をコードするcDNAをbaitとして酵母two-hybrid法でplacenta cDNA libraryからMCC(mutated in colon cancer)癌抑制遺伝子のホモローグMCC-2をクローニングした。さらに、腎臓および大腸のcDNAライブラリーからWnt pathwayのkeyとなる複数の蛋白がクローニングされた(未公表)。そこで、AIE-75にこれらの蛋白が結合すると酵母のADE2レポーター遺伝子が転写される系を作製した。この系ではAIE-75蛋白に変異があればADE2レポーター遺伝子が転写されないために酵母は赤くなる。このように酵母の色彩変化を指標としてcDNAの変異を検出する系を作製している。現在、これらのアッセイ系はフレームシフト変異とナンセンス変異の検出は正しく行えるが、ミスセンス変異についてはまだ不十分で改善の余地がある。AIE-75結合蛋白の多くはシグナル伝達経路のメンバーであるので酵母内にこの経路を再構築してこの経路が動くか否かによって全ての変異を検出できる系を作製中である。

研究成果

• [文献書誌] 守内哲也: "Identification of an autoimmune enteropathy-related 75-kilodalton antigen"Gastroenterology. 117. 823-830 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers"Am. J. Pathol.. (印刷中).
• [文献書誌] 守内哲也: "Dominant negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Res.. 59. 4765-4769 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "A functional and quantitative mutational analysis of p53 mutations in yeast indicates strand biases and different roles of mutations in DMBA- and BBN-induced tumors"Int. J. Cancer. 83. 700-705 (1999)
• [文献書誌] 守内哲也: "Distinct prognostic values of p53 mutation and loss of estrogen receptor and their cumulative effect in primary breast cancers"Int.J.Cancer. 89. 92-99 (2000)
• [文献書誌] 浜田淳一: "Increased E1AF expression in mouse fibrosarcoma promotes metastasis through induction of MT1-MMP expression"Oncogene. 18. 1771-1776 (1999)