1999 年度実績報告書

吸血性昆虫唾腺由来の新しい抗凝固・血管拡張物質の構造機能解析と新規医薬の創製

研究課題

研究課題/領域番号	11557022
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	三重大学
研究代表者	鎮西康雄三重大学, 医学部, 教授 (60024709)
研究分担者	伊藤正明三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181) 油田正夫三重大学, 医学部, 助手 (90293779) 三浦健三重大学, 医学部, 講師 (60219582)
キーワード	血液凝固 / インヒビター / オオサシガメ / ファクターIX / プロリクシンS
研究概要	オオサシガメ唾液線由来の血液凝固インヒビター、プロリクシンS、をバキュロウイルスをもちいて昆虫細胞で大量発現させた。この組み替え蛋白を用いて種々の凝固因子との結合実験、再構成系での酵素活性阻害実験をおこない、プロリクシンSの凝固阻害機構をほぼ完全に解明することができた。1、プロリクシンSは凝固第IX因子および活性化後のIXa因子に特異的に結合する。2、この結合には生理的濃度のカルシウムイオンの存在が必須である。3、プロリクシンSの凝固第IX因子への結合により、XIa因子及びVIIa/組織因子/リン脂質複合体による活性化IX因子のが阻害される。4、IXa因子へのプロリクシンSの結合はこの因子のリン脂質への結合を阻害し、これによりIXa/VIIIa/リン脂質複合体(Xase complex)の形成が阻害される。以上の結果(3、4)よりプロリクシンSは内因系凝固ばかりでなく外因系凝固も同時に阻害することが新たに明らかになった。5、IX因子から細胞膜結合部位であるGlaドメインを除くとプロリクシンSが結合できなくなった。このことにより、プロリクシンSのIX因子への結合部位がGlaドメインであり、カルシウムイオンの結合によるこのドメインの構造変化を認識して結合することが推測された。今後、プロリクシンS/Glaドメイン複合体を結晶化する予定である。すでにGlaドメインを化学合成した。これとバキュロウイルスをもちいて大量発現させたプロリクシンSを用いてプロリクシンSの構造と機能のさらに詳しい解明をおこないたい。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] P.Waidhet et al.: "Purification and characterization of a thrombin inhibitor from the salivary glands of a malarian vector mosquito, Anopheles stephensi"Biochem.Biophy.Acta.. 1381. 227-233 (1999)
[文献書誌] Jianxin Sun et al.: "Characterization and cDNA cloning of a hemoprotein in the salivary glands of the blood-sucking insect, Rhodnius prolixus"Insect Biochem.Mol.Biol.,. 28. 191-200 (1999)
[文献書誌] Yuji Kaneko et al.: "Kinetic analysis on nitric oxide binding of recombinant Prolixin-S, a nitric oxide transport protein from the bug, Rhodnius prolixus"Biochemica et Biophysica Acta.. 1431. 492-499 (1999)
[文献書誌] Jianxin Sun et al.: "Changes in salivary gland proteins during blood feeding in Rhodnius prolixus, and dynamics of antibodies specific to salivary antigens"Med.Entomol.Zool.. 50. 41-50 (1999)
[文献書誌] Yuji Kaneko et al.: "Effects of recombinant nitrophorin-2 nitric oxide comples on vascular smooth muscle"Biosci.Biotech.Biochem.,. 63. 1488-1490 (1999)
[文献書誌] Haruhiko Isawa et al.: "The insect salivary protein, prolixin-S,inhibits factor Ixa generation and Xase complex formation in the blood coagulation pathway"J.Biol.Chem.. 275. 6636-6641 (2000)

1999 年度 実績報告書

吸血性昆虫唾腺由来の新しい抗凝固・血管拡張物質の構造機能解析と新規医薬の創製

研究代表者

鎮西 康雄 三重大学, 医学部, 教授 (60024709)

研究成果

[文献書誌] P.Waidhet et al.: "Purification and characterization of a thrombin inhibitor from the salivary glands of a malarian vector mosquito, Anopheles stephensi"Biochem.Biophy.Acta.. 1381. 227-233 (1999)

[文献書誌] Jianxin Sun et al.: "Characterization and cDNA cloning of a hemoprotein in the salivary glands of the blood-sucking insect, Rhodnius prolixus"Insect Biochem.Mol.Biol.,. 28. 191-200 (1999)

[文献書誌] Yuji Kaneko et al.: "Kinetic analysis on nitric oxide binding of recombinant Prolixin-S, a nitric oxide transport protein from the bug, Rhodnius prolixus"Biochemica et Biophysica Acta.. 1431. 492-499 (1999)

[文献書誌] Jianxin Sun et al.: "Changes in salivary gland proteins during blood feeding in Rhodnius prolixus, and dynamics of antibodies specific to salivary antigens"Med.Entomol.Zool.. 50. 41-50 (1999)

[文献書誌] Yuji Kaneko et al.: "Effects of recombinant nitrophorin-2 nitric oxide comples on vascular smooth muscle"Biosci.Biotech.Biochem.,. 63. 1488-1490 (1999)

[文献書誌] Haruhiko Isawa et al.: "The insect salivary protein, prolixin-S,inhibits factor Ixa generation and Xase complex formation in the blood coagulation pathway"J.Biol.Chem.. 275. 6636-6641 (2000)

1999 年度実績報告書

鎮西康雄三重大学, 医学部, 教授 (60024709)