| 研究課題/領域番号 |
11557053
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
斎藤 能彦 京都大学, 医学研究科, 助教授 (30250260)
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| 研究分担者 |
寺岡 宏 塩野義製薬株式会社, 診断医学事業部, 部長(研究職)
吉村 道博 熊本大学, 医学部・附属病院, 講師 (30264295)
小川 佳宏 京都大学, 医学研究科, 助手 (70291424)
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| キーワード | eNOS遺伝子 / 遺伝子多型 / RPA1 / マイクロプレート法 / NOx |
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| 研究概要 |
転写因子病としての冠攣縮性狭心症とよく関連するeNOS遺伝子T-786C変異とこの変異体に結合するサプレッサーであるRPAを精製することに成功したが、本年度このRPA1の発現が本当にヒトで確認できるか、また、ヒトで変異型genotypeを持つ症例でeNOSmRNAの発現レベルが低下しているかを確認した。
1.生体組織におけるRPA1の発現と-786C変異がeNOS遺伝子発現に及ぼす影響の検討
ヒトの生体組織においてRPA1が血管組織に発現し、-786C変異がeNOS遺伝子の遺伝子発現に影響を与えているかを、血管組織が豊富なヒト胎盤組織を用いて検討した。ウエスタン・ブロット法にて胎盤組織にRPA1が存在することが確認されRPA1の発現量は遺伝子型に影響されていなかった。しかし、eNOSmRNAの発現量は-786変異を有する胎盤組織では、野生型ホモに比べeNOS遺伝子の発現が減少していることがRNase protection法にて確認された。また、eNOS蛋白質の産生物質であるNOの血清レベルをNOxを測定することで検討したところ-786変異を有するヒトは野生型ホモに比べ、そのNOxレベルが有意に低値であり、-786変異を有するヒトにeNOS蛋白の量的あるいは機能的低下が存在することが予想された。現在さらに、eNOS遺伝子の-786変異と動脈硬化性疾患及び、糖尿病やその血管合併症の成因との関連を検討している。
2.キット化に関する検討
eNOS遺伝子T-786C変異の診断法に焦点をあてて、マイクロプレートを用いたReverse Hybridization法でS/N比が高い測定系が確立された。
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