| 研究概要 |
内分泌撹乱物質の生殖腺形成に与える影響を明らかにするためには,その作用メカニズムを解明することが重要である。本研究では生殖腺の形成初期過程で発現する種々の転写因子やエストロジェンレセプターを研究対象として,その発現やリガンド類似物質の影響を検討するアッセイ系を確立するものである。本年度はエストロジェンレセプターに対するリガンド類似物質の結合強度をアッセイするシステムを構築した。本研究においては分子間相互作用を鋭敏に検出することが可能なビアコアによるアッセイを行った。センサーチップ上にエストロジェンレセプター結合配列をもつビオチン化オリゴヌクレオチドを結合させ,各種物質の存在下におけるエストロジェンレセプターのDNA結合能を調べた。これまでに知られている種々のエストロジェン様物質はエストロジェンレセプターのDNA結合能を濃度依存的に促進させることが明らかになった。このことは,本アッセイ系を用いることで,各種化学物質がエストロジェン様作用を示すか否かを極めて簡単に調べることが可能となった。アンドロジェンレセプターを用いて,同様のアッセイ系を構築することを試みているが,アンドロジェンレセプターがバキュロウイルスを用いた発現系ではDNA結合活性を有する状態では発現しないことが分かり,現在更に検討中である。
また,生殖腺形成過程でAd4BP/SF-1やDax-1などの核内受容体が発現することが知られているが,これらのリガンドはこれまでのところ不明である。同様のアッセイ系を用いリガンドの検索を行っているが,Ad4BP/SF-1の蛋白質としての不安定性のため再現性のある結果を得ることが困難な状態である。このことは,リガンド非存在下における本因子の特徴かもしれず,今後の検討課題である。
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