| 研究課題/領域番号 |
11557082
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
石井 誠一 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (60221066)
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| 研究分担者 |
椎葉 健一 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (90196345)
大谷 明夫 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (30133987)
佐藤 靖史 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (50178779)
溝井 腎幸 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90271949)
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| キーワード | 大腸癌 / 転移 / 生体顕微鏡 / GFP / 微小循環 |
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| 研究概要 |
1GFP導入ヒト大腸癌細胞株の樹立
EGFP-expression vectorを用いてlipofection法により転移能の異なる3種のヒト大腸癌細胞株への導入を試み、それぞれのstable transcectantsを樹立した。
2ヒト大腸癌細胞のヌードマウス同所移植自然転移系の樹立
ヒト大腸癌細胞株のヌードマウス盲腸内移植による自然肝転移モデルを作製した。その際、癌細胞株をPBSまたは細胞培養液に浮遊しマウス盲腸漿膜下に注入した場合、局所腫瘍形成率と肝転移形成率はともに低率であった。そこで癌細胞を細胞外基質蛋白ゲル(マトリゲル)に浮遊して盲腸漿膜下注入を試みた結果、高転移性癌細胞株ではより高率に局所腫瘍形成と肝転移を得た。一方、低転移株ではマトリゲルによる転移亢進効果を認めなかった。移植局所の組織像および血管内皮細胞の免疫組織化学では、高転移株のマトリゲル浮遊群で移植24時間後より著明な腫瘍血管新生の誘導を認めた。ELISA法でVEGF産生能を確認したところ、VEGF産生と転移能との相関は明確ではなかった。その他の血管新生因子産生についてRT-PCR法で確認中である。
3生体蛍光顕微鏡によるマウス微小循環の解析
生体蛍光顕微鏡システムを導入し、GFP導入ヒト大腸癌細胞株のヌードマウス盲腸内移植局所における腫瘍血管新生像を解析した。その結果、移植後の早期より著明な腫瘍血管が誘導されることを確認した。現在、微量注入注射器を用いた、極少数の癌細胞移植により同様の解析を進めている。
4NOD/SCID-Huの作製
健丈人volunteerより骨髄細胞の提供を受け、ヒト大腸癌細胞株とともにマトリゲルに浮遊してNOD/SCIDマウスに移植した。免疫組織化学にてヒト内皮細胞由来の血管新生の有無を確認中であり、今後は骨髄細胞中の血管内皮前駆細胞を分離して同様の実験を予定している。
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