| 研究課題/領域番号 |
11557086
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
宮川 周士 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
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| 研究分担者 |
村上 博 日本ハム, 中央研究所, 研究員
鄭 文玉 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (60252657)
岡部 勝 大阪大学, 遺伝情報実験施設, 教授 (30089875)
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| キーワード | α1-3GT / Knockout / ターゲッティングベクター / Cre-loxP system / コドン |
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| 研究概要 |
1)Knockout(α1-3GTKO)マウスの作成
臓器特異的α1-3galactosyltransferase Knockout(α1-3GTKO)マウスの作成を目指すため、平成12年度は、既に作成したターゲッティングベクターで、129マウスのlineのES細胞で相同組み換えをおこし、桑実胚に移植する方法でこのα1-3GTをloxPではさんだDNAをもつマウスのlineを2line作成した。現在pCAGGS-Cnのトランスジェニックマウスと交配して、Cre-loxPのin vivoでの組み換え効果を検討している。
2)Codon usageを哺乳類型にしたCre.
CD59遺伝子をloxPではさみ、そのあとEgfpが続く構築のpCXN-YK1(pCX-olxP-CD59-loxP-EGFP)を持つCHO細胞のlineを作成した(#29#30)。つぎに、これにpCXN(beta actin promoter)とpMC1(thymidine kinase promoter)のそれぞれに、野生型のCreと平成11年度に各アミノ酸のコドンが哺乳類の細胞で利用頻度の高いコドン配列を選び合成した哺乳類型Creは比較的弱いpromoterのpMC1を使った場合、かつ導入遺伝子量が少ないときに、野生型のCreに比し有意に高い組み換え率を示した。
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