| 研究課題/領域番号 |
11557119
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
産婦人科学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
矢野 哲 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (90251264)
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| 研究分担者 |
田沼 靖一 東京理科大学, 薬学部, 教授 (10142449)
大須賀 穣 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (80260496)
百枝 幹雄 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50221627)
木村 達治 東燃(株), 総合研究所, 研究職員
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| キーワード | アポトーシス / 卵巣がん / 子宮内膜がん / DNase / ペプチドアナログ / GnRHアナログ |
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| 研究概要 |
RT-PCRによりヒト上皮性卵巣がん細胞株(HTOA、OV-1063、OVCAR-3)、ヒト子宮内膜がん細胞株(HEC-1、HHUA)において、GnRHおよびGnRHリセプターのmRNAの発現が確認された。また、上記がん細胞株において、DNase γおよびCAD(caspase 3-activated DNase)のmRNAの発現がRT-PCRにより確認された。ヒト上皮性卵巣がん細胞株HTOA細胞培養系において、GnRHアゴニスト(buserelin)およびアンタゴニスト(cetrorelix)によるアポトーシス誘導がTUNEL法により確認されたが、後者の効果がより大きかった。ヌードマウスに移植されたHTOA腫瘍の増殖は、buserelinとcetrorelixの持続投与(100μg/day)により同程度に抑制されたが、この増殖抑制のメカニズムの一つとしてアポトーシスが考えられるため、現在、DNase γとの関連について検討している。一方、HTOA細胞培養系においてEGFにより促進されたチロシンキナーゼのリン酸化反応がbuserelinおよびcetrorelixにより抑制されたが、細胞周期停止も増殖抑制のメカニズムの一つとして考えられ、さらなる検討を要する。我々が既に作製済みの抗DNase γポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の性状について検討したところ、いずれにおいても認識特異性の点で問題のあることが判明した。実際、このモノクローナル抗体を用いたウエスタンブロット法により、上記5種の細胞株におけるDNase γのタンパクレベルでの発現を確認できなかった。これらの問題点はDNase γの一次構造が他のDNase Iファミリーエンドヌクレアーゼにも高度に保存されていることに起因すると考えられた。そこで、DNase γにユニークなC末端塩基性ドメインを抗原に用いヒトDNase γを特異的に認識するモノクローナル抗体の作製を試み、2つのモノクローナル抗体(mAb)、hg302及びhg303を得ることに成功した。今回新規に作製されたDNase γ特異的モノクローナル抗体は、DNase γを特異的に検出するELISA系およびウエスタンブロット系を構築するにあたり十分な特異性を有していることが明らかとなった。
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