| 研究課題/領域番号 |
11557138
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 展開研究 |
|---|
| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
|
|---|
| 研究機関 | 長崎大学 |
|---|
研究代表者 |
加藤 有三 長崎大学, 歯学部, 教授 (20014128)
|
|---|
| 研究分担者 |
小林 泰浩 長崎大学, 歯学部, 助手 (20264252)
柴田 光枝 長崎大学, 歯学部, 助手 (20274665)
坂井 英昭 長崎大学, 歯学部, 助教授 (40225769)
粟屋 昭 三井製薬工業, 製品計画部, 主席部員
坂井 詠子 長崎大学, 歯学部, 教務職員 (10176612)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1999 – 2001
|
| キーワード | D-PDMP / Glycolipid / Metalloprotease / Osteoclast / Osteoprotegerin (OPG) / Processing enzyme / RANKL / Shedding |
|---|
| 研究概要 |
破骨細胞形成に必須の因子であるRANKL (receptor activator of NF-κB ligand)には膜結合型と遊離型が存在している。膜結合型と遊離型RANKLの解析のために、破骨細胞形成支持能のあるST2細胞をビタミンD3とデキサメサゾンで処理した。一般にST2細胞にはRANKLの発現は認められないが、ビタミンD3とデキサメサゾン処理することにより膜結合型RANKLに加え培養液中に分子量約30kDaの遊離型RANKLが確認された。遊離型RANKLの同定は、RANKLのおとり受容体であるOPG (osteoprotegerin)を固相化したレジンでRANKLを沈降させウエスタンブロット法で検出するLRP (ligand-receptor precipitation)法によって行った。さらに、遊離型RANKLのN末端アミノ酸配列を決定したところ、膜結合型からの切り出しはArg (138)-Phe (139)の間で行われており、この切断はメタロプロテアーゼ阻害剤であるKB8301で完全に抑制された。現在のところこの切断酵素の候補として、ADAMファミリータンパク質があげられており、それらの中の分子種のうち、ST2細胞では少なくともTACE (ADAM17)とKuzbanian (ADAM10)のmRNAが発現していることがRT-PCRで確認された。
また、細胞において様々な役割を担っている糖脂質の破骨細胞形成能における機能を調べるため、破骨細胞前駆細胞に糖脂質の合成阻害剤(_D-PDMP)を加えたところ、破骨細胞への分化が抑制された。糖の戻し実験やNF-κBやERKのリン酸化の実験により、lactosylceramide (LacCer)が_D-PDMPによって抑制された破骨細胞前駆細胞の分化を有意に回復し、破骨細胞への分化におけるLacCerの重要性が示唆された。
|
