1999 年度実績報告書

Gene tip micro arrayの遺伝子診断への応用

研究課題

研究課題/領域番号	11557201
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	東北大学
研究代表者	鈴木洋一東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80216457)
研究分担者	成沢邦明東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90004647)
キーワード	DNAマイクロアレー / 遺伝子診断 / 筋ジストロフィー
研究概要	緒言:本年度の本研究では、デュシェンヌ型筋ジストロフィー(DMD)をえらび、DNAマイクロアレーをその遺伝子診断に利用する方法を開発した。方法:マイクロアレーの作成はDMDの責任遺伝子であるジストロフィン遺伝子のエクソン43から51、エクソン8と19をそれぞれPCRで増幅し、日本レーザのGTMASSスタンピング装置を用い、ポリLリジンをコートしてあるスライドグラスにスポットし、固定化処理を行い作成した。Cy5標識ターゲットcDNAは正常およびDMD患者のリンパ芽球のtotal RNAより、ジストロフィンmRNAの翻訳領域を10分割しRT-PCRを行い得た。蛍光標識は2回目のPCR反応時にCy5dUTPを取り込ませることによった。ハイブリダイゼーションは、複数の蛍光標識ターゲットcDNAを混合しマイクロアレーのスポットとインキュベーションすることで行い、洗浄後、蛍光をGTMASS Scannerで検出した。結果:正常リンパ芽球のcDNAの断片7はエクソン43から51を含んでいるが、これをマイクロアレーに対しハイブリダイゼーションを行うとエクソン43から51までのスポットは蛍光が認められ、エクソン8と19には蛍光は認められなかった。パルチプレックスPCR法にてあらかじめエクソン44の欠質がわかっていた患者についてゲノムDNA又はcDNAの蛍光標識PCR産物をマイクロアレーとハイブリダイズさせると、エクソン44に相当する蛍光スポットが検出されなかった。この方法でエクソンの欠失のような大きな遺伝子の変異は検出可能と思われた。考案:DMD患者の約70%は遺伝子の大きな欠失や挿入変異であり、マルチプレックスPCR法による診断も可能であるが診断率は不十分であり、新たな方法の開発が望まれる。本研究で用いた方法はほとんどのエクソン欠失、スプライス異常の検出が可能であり、診断率を上げることが期待される。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Aoki Y. et al.: "Identification and characterization of mutations inpatients with holocarboxylase synthetase deficiency"Human Genetics. 104,2. 143-148 (1999)
[文献書誌] Hou D. et al.: "Glycogen storage disease type Ib: structural and mutation analysis of the microsomal glucose-6-phosphate transporter gene"American Journal of Human Genetics. 86,3. 254-257 (1999)
[文献書誌] Sakamoto O. et al.: "Relationship between kinetic properties of mutant enzymes and biochemical and clinical responsiveness to biotin in holocarboxylase synthetase deficiency"Pediatric Research. 46,6. 671-676 (1999)
[文献書誌] Sakamoto O. et al.: "Diagnosis and mutation analysis of an atypical case of holocarboxylase synthetase deficiency"Europian Journal of Pediatrics. 159,1-2. 18-22 (2000)
[文献書誌] Fujii K. et al.: "Mutation detection by TaqMan-allele specific amplification: Application to molecular diagnosis of glycogen storage disease type Ia and medium-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency"Human Mutation. 15,2. 189-196 (2000)
[文献書誌] 鈴木洋一 (共著): "生体の科学"金原出版. 512 (1999)

1999 年度 実績報告書

Gene tip micro arrayの遺伝子診断への応用

研究代表者

鈴木 洋一 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80216457)

研究成果

[文献書誌] Aoki Y. et al.: "Identification and characterization of mutations inpatients with holocarboxylase synthetase deficiency"Human Genetics. 104,2. 143-148 (1999)

[文献書誌] Hou D. et al.: "Glycogen storage disease type Ib: structural and mutation analysis of the microsomal glucose-6-phosphate transporter gene"American Journal of Human Genetics. 86,3. 254-257 (1999)

[文献書誌] Sakamoto O. et al.: "Relationship between kinetic properties of mutant enzymes and biochemical and clinical responsiveness to biotin in holocarboxylase synthetase deficiency"Pediatric Research. 46,6. 671-676 (1999)

[文献書誌] Sakamoto O. et al.: "Diagnosis and mutation analysis of an atypical case of holocarboxylase synthetase deficiency"Europian Journal of Pediatrics. 159,1-2. 18-22 (2000)

[文献書誌] Fujii K. et al.: "Mutation detection by TaqMan-allele specific amplification: Application to molecular diagnosis of glycogen storage disease type Ia and medium-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency"Human Mutation. 15,2. 189-196 (2000)

[文献書誌] 鈴木洋一 (共著): "生体の科学"金原出版. 512 (1999)

1999 年度実績報告書

鈴木洋一東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80216457)