| 研究課題/領域番号 |
11558109
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
吉里 勝利 広島大学, 理学部, 教授 (20095516)
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| 研究分担者 |
大房 健 広島大学, 理学部, 助手 (50243548)
小原 政信 広島大学, 理学部, 助教授 (60132479)
片倉 健男 テルモ株式会社, 研究開発センター, 主任研究員
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| キーワード | コラーゲン / キメラタンパク質 / IL-2 / bFGF / EGF / バイオマテリアル / バキュロウイルス発現系 |
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| 研究概要 |
我々は、昆虫細胞を用いた組み換えコラーゲン合成システムと遺伝子工学的手法を利用し、コラーゲンとサイトカインや成長因子を連結したキメラ分子を作製することを試みた。さらにこのキメラコラーゲンを非組み換え型コラーゲンと共にゲル化(線維化)させることにより、これらの因子をコラーゲンゲル内に固定化し、組織工学分野でもちいられるバイオマテリアルやドラッグデリバリー材料として活用するための条件を検討した。
ヒトIII型プロコラーゲンcDNAのアミノプロペプチドをコードする領域及び、ヒトIL-2、bFGF、EGFのcDNAをそれぞれ連結した。このIII型プロコラーゲンキメラcDNAをバキュロウイルストランスファーベクターpBacPAK9に組み込み、これを更にバキュロウイルスDNAと共に昆虫細胞Sf9にトランスフェクションすることにより、組み換えバキュロウイルスを作製した。この組み換えバキュロウイルスをSf9細胞に感染させ培養上清中のタンパク質を回収した。SDS/PAGEにより解析した結果、Sf9細胞によるIII型プロコラーゲンキメラタンパク質の合成および培養上清中への分泌を確認した。さらに抗III型コラーゲン抗体、抗IL-2抗体、抗bFGF及び抗EGF抗体でウエスタンブロットを行い、キメラタンパク質がIII型コラーゲン抗体及びそれぞれの増殖因子に対する抗体と反応することを確認した。また、ペプシン消化実験を行うことにより、このキメラタンパク質が三重らせん構造を有していることも明らかにした。
キメラタンパク質の細胞増殖活性を測定した結果、キメラタンパク質は単独で発現させた増殖因子同様に細胞増殖活性を有していることが明らかとなった。このキメラタンパク質はバイオマテリアルや徐放性ドラッグデリバリー材料として有用であると考えている。
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