| 研究課題/領域番号 |
11650818
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
桂樹 徹 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教授 (80081579)
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| 研究分担者 |
吉田 信行 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (10273848)
谷 吉樹 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (60026424)
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| キーワード | 単細胞レベル解析 / 細胞分取 / フローサイトメトリー / マイクロゲルビーズ / アスタキサンチン / チアミン / ピロロキノリンキノン / 微生物生産 |
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| 研究概要 |
Haematococcus pluvialisの変異処理によって著量生産株を取得を続行して試みた。アスタキサンチン(ASX)の含量がより高いと思われる、より強い蛍光を発するシストを分取し、培養してシスト化させ、再びサイトメトリー解析したが、いままでのところ、親株のものと異なるサイトグラムパターンを示す株は取得できていない。つまり、継代培養すると著量生産性が徐々に失われる。
パン酵母が生成するチアミン(B1)をサイトメトリーで定量した。酵母細胞をガラス薄膜フィルターを用いるマイクロゲルビーズ法でマイクロコロニーとし、これを培養してB1を生成させ、チオクローム反応法により定量するが、反応の条件を検討し、標準3分の処理時間を0.5分以内にすれば、3%NaOHの条件で、サイトメトリー解析が可能で、しかも、生細胞を回収できた。しかしながら、変異処理による著量生産株の分取については、取得した株を継代培養すると著量生産性が徐々に失われて、いまのところ、安定した株は得られていない。
補酵素ピロロキノリンキノン(PQQ)を活性化補酵素などの形で生成する乳酸菌Acetobacter aceti, Gluconobacter oxidansを新たなモデル系として追加した。PQQは〜378nmに励起極大、〜482nmに蛍光極大を持つ。乳酸菌を培養し、紫外線レーザー(325nm)を用いてサイトメトリー解析した。培地の種類、培養時間によって明らかにサイトグラムの形が異なっていたが、これと菌体から抽出してHPLC、および酵素法で求めた含有量との間には明確な相関性は見られなかった。
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