| 研究課題/領域番号 |
11660098
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| 研究機関 | 国立環境研究所 |
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研究代表者 |
内山 裕夫 国立環境研究所, 水土壌圏環境部, 室長 (00185042)
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| 研究分担者 |
野村 暢彦 筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (60292520)
冨岡 典子 国立環境研究所, 水土壌圏環境部, 主任研究員 (40168399)
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| キーワード | トリクロロエチレン / メタン酸化細菌 / シャペロニン / バイオレメディエーション |
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| 研究概要 |
申請者らはバイオレメディエーション技術によるトリクロロエチレン浄化を行うため、トリクロロエチレン分解菌メタン酸化細菌Methylocystis sp.strain M(M株)を単離・同定した。これまでに、M株は分解中間産物によって阻害を受け、その結果、生体解媒としては比較的寿命が短く今後の実用化に向けて解決すべき課題であることが明らかとなった。本研究ではこの問題を解決するために、分解酵素である可溶性メタンモノオキシゲナーゼ(sMMO)遺伝子上流域にコードされているシャペロニン様遺伝子に注目し、この全塩基配列を決定すると共にメタンモノオキシゲナーゼのアセンブリーとの関連性を明らかにする。また、トリクロロエチレン特異的なストレスタンパクの解析も行う。本年度は、以下の点を明らかにした。
1.sMMO遺伝子群の上流域をシーケンスした結果、約450bp上流部に2つのオープンリーディングフレームが認められ、それぞれをCpu10,Cpn60と仮称した。
2.それぞれの塩基配列を解析した結果、Cpn10領域にはロイシンジッパーモチーフが認められ、Cpn60領域にはシャペロニン60シグニチャーが観察された。
3.データベースを用いて相同性検索を行った結果、Cpn10とホモロジーを有すタンパクは見いだされず、一方、Cpn60ともっとも高い相同性を示したのはRhodobocter capsulayusのCpn60で、約40%であった。
4.Cpn10、Cpn60をそれぞれ発現ベクターと連結してE.coliに導入した結果、Cpn10タンパクを多量に調製することが出来たが、Cpn60タンパクはインクルージョンボディーを形成したため、他のシャペロニン共存下での発現化を試みている。
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