| 研究概要 |
Bipolaris sorokinianaの1菌株,OB-25-1株の生産する植物毒sorokinianinはセスキテルペン,prehelminthosporol(preH)にC3単位が付加した構造をもつ.安定同位体標識した酢酸やコハク酸の投与実験,preHとC3単位の候補化合物との置換培養実験などが行われ,preHがセスキテルペン部分の前駆体で,C3単位がTCA回路の酸由来であることが証明された.TCA回路の酸の中では,コハク酸,フマル酸,リンゴ酸,オギザロ酢酸がC3単位の直接の前駆体と考えられた.そのいずれかが直接の前駆体であるかを調べるために^<18>O標識リンゴ酸が調製され,投与実験が行われた.得られたsorokinaninをGCMSで分析した結果,sorokinianinのC3単位部分には^<18>Oが取り込まれないことがわかった.このことは,コハク酸,フマル酸がC3単位の直接の前駆体であることを示している.一方,preHとコハク酸またはフマル酸とが付加した最初の中間体を特定するために,^<14>C標識preHと^3H標識コハク酸の同時投与実験を計画した.そのために,先ず,^<14>C標識preHの調製を試みた.標識されていないグルコースを糖源に用いた改変Fries培地を作成し,B.sorokiniana OB-25-1を接種する際に,D-[U-^<14>C]glucose(37MBq)を同時に投与した.9日間静置培養した後,得られた培養濾液を酢酸エチルで抽出し,抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー,HPLCで精製し,1.7mgのpreHを単離した.得られた^<14>C標識preHの比放射活性は,35KBq/mgであった.
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