研究概要 |
トランスジェニックマウスを作る前段階として、Per1,Per2,Per3 cDNAの採取、おのおのの遺伝子の上流の調節領域を採取し、そのプロモーター活性を測定した。まず、マウスのPer1,Per2,Per3 cDNAのcoding regionを報告された配列に従って、PCRを用いてその全長を採取した。これらのcDNAを発現ベクターに組み込んでエピトープタッグとしてFLAGを下流に結合し、株化細胞であるCOS7に発現させたところ、Western blottingにてタンパクの発現を検出できた。また、Green fluorescent proteinにPer1,Per2,Per3を結合させて、その発現を観察した。主に細胞質での発現を認めたが、一部の細胞においては、核内での発現があった。また、Per1,Per2,Per3のプロモーター部位を採取するために、Per1,Per2,Per3の部分配列をプローブとして、ジェノミックライブラリ一をスクリ一ニングしおのおのの遺伝子の調節領域を得た。おのおのの調節領域を、ルシフェラーゼ遺伝子の上流につなぎ、株化細胞に導入してルシフェラーゼアッセイを行ったところルシフェラーゼ遺伝子の活性化を認めた。すなわち、プロモーター活性を示した。現在これらの材料を用いて、トランスジェニックマウスの作成を行っている。具体的には、これらの遺伝子の発現量が増大した際にサーカディアンリズムの周期に変動が生じるかどうか、また、本来著明な日周変動を示すPer1,Per2の振動をなくするために、神経細胞で特異的に発現するneuron specific enolaseのプロモーターをPer1,Per2cDNAにつないでマウスに導入し、その変化を観察する予定である。
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