ノックアウトマウスの創生によるアニオン性薬物トランスポーターの機能解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670100
• 研究機関: 杏林大学
• 研究代表者: 車 碩鎬 杏林大学, 医学部, 助手 (50276200)
• 研究分担者: 武田 理夫 杏林大学, 医学部, 講師 (40255401) ; 金井 好克 杏林大学, 医学部, 助教授 (60204533) ; 遠藤 仁 杏林大学, 医学部, 教授 (20101115) ; 細山田 真 杏林大学, 医学部, 助手 (00291659) ; 関根 孝司 杏林大学, 医学部, 助手 (50255402)
• キーワード: organic anion transporter / drug transporter / pharmacokinetics / kidney / liver / brain / gene targetting / knockout mouse

研究概要

本研究課題の初年度である平成11年度は、ラットOAT1,OAT2およびOAT3のそれぞれのcDNAを用いてマウスホモログ(mOAT1,mOAT2およびmOAT3)の単離を行い、それぞれの機能解析および組織発現の検討を行った。特に、生体内での役割の意義が明確ではないOAT2およびOAT3の解析を優先した。
mOAT2 mRNAは腎臓に高い発現を示し、rOAT2が肝臓に高発現しているのと対照的であった。アフリカ爪ガエル卵母細胞を用いた機能解析の結果から、mOAT2がジカルボン酸、PGE_2などの有機アニオンを細胞外Naに非依存的に輸送することが明らかとなった。mOAT3は、腎臓および目に高発現し、脳にも発現を認めたが、肝臓には全く発現を認めなかった。mOAT3は、化学構造の異なる極めて多種類の有機アニオン(cyclic nucleotide、PGE2、ジカルボン酸、胆汁酸、メトトレキセート、パラアミノ馬尿酸、NSAIDsなど、)を輸送し、かつこれらの多種類の基質に対して高い親和性を有することが明らかとなった。mOAT1 mRNAは、腎臓に高い発現を認め、現在、詳細な機能解析をおこなっている。
平成12年度は、mOAT1,2,3のcDNAを用いて、マウスゲノムライブラリーをスクリーニングし、ゲノム構造解析とターゲッティングベクターの作成を目指す。

研究成果

• [文献書誌] Cha SH,Sekine T,et al: "Molecular cloning and characterization of multispecific organic anion transporter 4 expressed in the placenta."J Biol Chem. 275. 4507-4512 (2000)
• [文献書誌] Nakajima N,Sekine T,Cha SH,et al: "Developmental changes in multispecific organic anion transporter 1 (OAT1) expression in the rat kidney."Kidney Int. (in press). (1999)
• [文献書誌] Sekine T,Cha SH,et al: "Molecular biology of multispecific organic anion transporter family (OAT family).(REVIEW ARTICLE)"Clin Exp Nephrol. 3. 237-243 (1999)
• [文献書誌] Tsada M,Sekine T,et al: "Transport of ochratoxin A by renal multispecific organic anion transporter 1."J Pharmacol Exp Ther. 289. 1301-1305 (1999)
• [文献書誌] Apiwattanakul N,Sekine T,et al: "Transport properties of nonsteroidal anti-inflammatory drugs by organic anion transporter 1 expressed in Xenopus laevis oocytes."Mol Pharmacol. 55. 847-854 (1999)
• [文献書誌] Jariyawat S,Sekine T,et al: "The interaction and transport of β-lactam antibiotics with the cloned rat renal organic anion transporter 1 (OAT1)."J. Pharmacol. Exp. Ther.. 290. 672-677 (1999)