ノックアウトマウスの創生によるアニオン性薬物トランスポーターの機能解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670100
• 研究機関: 杏林大学
• 研究代表者: 車 碩鎬 杏林大学, 医学部, 助手 (50276200)
• 研究分担者: 武田 理夫 杏林大学, 医学部, 講師 (40255401) ; 金井 好克 杏林大学, 医学部, 助教授 (60204533) ; 遠藤 仁 杏林大学, 医学部, 教授 (20101115) ; 稲富 淳 杏林大学, 医学部, 助手 (00311960) ; 細山田 真 杏林大学, 医学部, 助手 (00291659)
• キーワード: organic anion transporter / drug transporter / pharmacokinetics / kidney / liver / brain / gene targetting / knockout mouse

研究概要

本研究課題の初年度である平成11年度は、ラットOAT1,OAT2およびOAT3のそれぞれのcDNAを用いてマウスホモログ(mOAT1,mOAT2およびmOAT3)の単離を行い、それぞれの機能解析および組織発現の検討を行った。特に、生体内での役割の意義が明確ではないOAT2およびOAT3の解析を優先した。
平成12年度はmOAT1の機能解析および組織発現の検討を行った。MRNAは腎臓に高い発現を示した。アフリカ爪ガエル卵母細胞を用いた機能解析の結果から、mOAT1はexchangerでありrOAT1と同様に幅広い基質(有機アニオン性compound)を細胞外Na非依存的に輸送することが明かとなった。現在はOATノックアウトマウスの作製のためmOAT1,mOAT2,mOAT3のgenomic DNAをmouse strain 129のgenomic DNAのクローニングをしているところてある。その結果mOAT1はそのgenomic DNAのクローニングに成功しsequenceをしているところである。第1exonを含む15kb程度のmouse genomic DNAを確認しpBluscriptにサブクローニングし、第1exonをネオマイシン耐性遺伝子と入れ替えたconstructを作り、これをターゲッテイングベクターとし、mouse stain 129由来のES細胞に導入し、相同組み換え体をネオマイシン選択により単離する。得られた遺伝子ノックアウトES細胞をマウス胚に導入し、それを偽妊娠マウスの子宮に注入し、キメラマウスを得る。得られたキメラマウスと野生型マウスを交配し、homozygote(ヘテロ体)を得、ヘテロ体同志を交配して、ホモ体を得る予定である。

研究成果

• [文献書誌] Cha SH,Sekine T, et al: "Molecular cloning and characterization of multispecific organic anion transporter 4 expressd in the placenta"J Biol Chem. 275. 4507-12 (2000)
• [文献書誌] Nakajima N,Sekine T, et al: "Developmental changes in multispecific organic anion transporter 1 (OAT1) expression in the rat kidney."Kidney Int. 57. 1068-16 (1999)
• [文献書誌] Tsuda M,Sekine T, et al: "Transport of ochratoxin A by renal multispecific organic anion transporter 1"J Pharmacol Exp Ther. 289. 1301-5 (1999)
• [文献書誌] Sekine T,Cha SH,Endou H: "The multispecific organic anion transporter (OAT) family"Euro J Physiol. 440. 337-50 (2000)
• [文献書誌] Wada S,Tsuda M, et al: "Rat multispecific organic anion transporter 1 (rOAT1) transports zidovudine, acyclovir, and other antiviral nucleoside analogs."J Pharmacol Exp Ther. 294. 844-9 (2000)
• [文献書誌] Cha SH,Sekine T, et al: "Identification and characterization of human organic anion transporter 3 expression predominantly in the kidney"Mol Pharmacol. 59(In press). (2001)