2001 年度実績報告書

筋特異的選択的RNAスプライシングの分子メカニズムの研究

研究課題

研究課題/領域番号	11670132
研究機関	自治医科大学
研究代表者	遠藤仁司自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)
キーワード	筋分化 / ATP合成酵素 / RNAスプライシング / 選択的スプライシング / ミトコンドリア / スプライシングサイレンサー / スプライシング因子 / スプライシング調節
研究概要	真核生物ではミトコンドリアのATP合成酵素がほとんどのATPを供給している。本酵素ではγサブユニットの筋特異的なアイソフォームが選択的スプライシングにて生成される。本研究ではヒトATP合成酵素γサブユニットの筋特異的スプライシング調節のシス領域およびトランス因子を同定することを目的とした。前年度までに、筋特異的に働くエキソン上のスプライシングサイレンサー(Muscle-Specific Exonic Splicing Silencer ; MS-ESS)配列を明らかにした(J.Biol.Chem.2002,in press)。また本配列の上流にエンハンサー配列が存在することも同定した。本年度はトランス因子の精製を目的とした。まず、本遺伝子のMS-ESS配列を含む領域からリボプローブを作製し、選択的スプライシングの誘導前後の細胞から各々抽出した核抽出液を用いてノースウエスタン法を行いその条件を検討した。次に、各々抽出した核抽出液を硫安沈殿などによる部分精製を行った。これらの標品を用いて二次元電気泳動によるプロテオーム解析を行った。ノースウエスタン法の結果から、スプライシングエンハンサー領域に特異的に結合するスポットを少なくとも3スポット、MS-ESS配列に結合するスポットを2スポット検出した。MS-ESS配列に結合するタンパク量は微量であったため、現在、MS-ESS配列RNAを架橋したアフィニティクロマトグラフィーを作製して多量のタンパクの精製を試みている。またエンハンサー領域に結合するタンパクについては、二次元電気泳動によって得られたスポットを解析したところすべてアミノ酸末端がブロックされていたため、今後さらにタンパクを蓄積してタンパク分解酵素処理後、高速液体クロマトグラフィーにて内部のペプチドを分取しエドマン分解法にて一次配列決定を試みる予定である。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Hayakawa, M.: "Muscle-specific exonic splicing silencer for exon exclusion in human ATP synthase γ-subunit pre-mRNA"J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)
[文献書誌] Kirito, K.: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through stat5 and phosphatidyl inositol-3-kinase activation pathways."J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)
[文献書誌] Otsuki, T.: "Fanconi anemia protein, FANCA, associates with BRG1, a component of the human SWI/SNF complex"Hum.Mol.Genet.. 10. 2651-2660 (2001)
[文献書誌] Kagawa, Y.: "Gene therapy by mitochondrial transfer"Adv.Drug Deliv Rev.. 49. 107-119 (2001)
[文献書誌] Tanaka, M.: "Forkhead family transcription factor FKHRL1 is expressed in human megakaryocytes and regulates cell cycling as a downstream molecule"J.Biol.Chem.. 276. 15082-15089 (2001)
[文献書誌] Yoshida, S.: "Bacterial expressing single-chain immunotoxin inhibit malaria parasite development in mosguites"Mol.Biochem.Parasitol.. 113. 89-96 (2001)
[文献書誌] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修共立出版. 434 (2001)

2001 年度 実績報告書

筋特異的選択的RNAスプライシングの分子メカニズムの研究

研究代表者

遠藤 仁司 自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)

研究成果

[文献書誌] Hayakawa, M.: "Muscle-specific exonic splicing silencer for exon exclusion in human ATP synthase γ-subunit pre-mRNA"J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)

[文献書誌] Kirito, K.: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through stat5 and phosphatidyl inositol-3-kinase activation pathways."J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)

[文献書誌] Otsuki, T.: "Fanconi anemia protein, FANCA, associates with BRG1, a component of the human SWI/SNF complex"Hum.Mol.Genet.. 10. 2651-2660 (2001)

[文献書誌] Kagawa, Y.: "Gene therapy by mitochondrial transfer"Adv.Drug Deliv Rev.. 49. 107-119 (2001)

[文献書誌] Tanaka, M.: "Forkhead family transcription factor FKHRL1 is expressed in human megakaryocytes and regulates cell cycling as a downstream molecule"J.Biol.Chem.. 276. 15082-15089 (2001)

[文献書誌] Yoshida, S.: "Bacterial expressing single-chain immunotoxin inhibit malaria parasite development in mosguites"Mol.Biochem.Parasitol.. 113. 89-96 (2001)

[文献書誌] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修 共立出版. 434 (2001)

2001 年度実績報告書

遠藤仁司自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)

[文献書誌] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修共立出版. 434 (2001)