病態局所の酸素環境と好中球の代謝動態と生体防御について

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670146
• 研究機関: 大阪市立大学
• 研究代表者: 佐藤 英介 大阪市立大学, 医学部, 助手 (60211942)
• キーワード: 好中球 / 活性酸素 / チロシンリン酸化 / プライミング / 酸素

研究概要

腫瘍壊死因子(TNF-α)や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)等によるヒト末梢血好中球のプライミングには、チロシンキナーゼの活性化と数種の蛋白質のチロシンリン酸化が関与する。ウエスタンブロッテングと免疫沈降法による解析の結果、ヒト末梢血好中球にはLyn,Syk,Fgr,Hck,Btkの5種のチロシンリン酸化酵素が存在し、TNF-αによってLynとSykキナーゼが著明に活性化されることが判明した。また、プライミングによるスーパーオキシド産生およびチロシンリン酸化がSykキナーゼ阻害剤piceatanno1により抑制されることより、Sykキナーゼの関与が強いことが示唆された。この際、プライミングと平衡して115kDa蛋白質がリン酸化されることから、本反応がプライミングに関与する可能性が考えられる。プライミングはJAK2キナーゼ阻害剤AG490によって全く抑制されない。プロトオンコジーンc-Cb1の抗体を用いた免疫沈降解析により、115kDa蛋白質の一部はc-Cblであることが判明した。好中球様に分化したHL-60細胞を用いてTNF-α依存性プライミング反応におけるチロシンキナーゼの関与を解析した結果、末梢血好中球と同様に、srcキナーゼと115kDa蛋白質のリン酸化と同時にスーパーオキシドが産生されることが判明した。c-Cblのアンチセンスを用いた解析により、本プライミングの一部にc-Cblが関与する可能性が示唆された。さらに、P38 MAP kinaseの抑制剤や免疫抑制剤として知られるサイクロスポリンがチロシンリン酸化を抑制することなくプライミング反応を抑制することから、MAP kinaseやPI3 kinaseなどのリン酸化酵素が本現象に関与する可能性が示された。

研究成果

• [文献書誌] Takada,Y.,Sato.E.F.,Nakajima,T.,Hosono.M.,Tsumura,M.,Inoue,M.Yamada,R.: "Granulocyte-colony stimulating factor enhances antitumor effect of hyperthermia"J.Hyperthermia.. 16・3. 275-286 (2000)
• [文献書誌] Nakamura,A.,Park,AM.,Nagata,K.,Sato.EF.,Tamura.T.,Inoue.M.: "Oxidative cellular damage associated with transformation of Helicobacter pylori from a bacillary to a coccoid form"Free Radic.Biol.Med. 28・11. 1611-1618 (2000)
• [文献書誌] Inoue,M.,Nishikawa,M.,Sato,E.F.,Paku A.,Kashiba,M.,Takehara,Y.,Utsumi.K.: "Cross-talk between NO and oxyradicals, a supersystem that regulates energy metabolism and survival of animals"Free Radic.Res. 33・. 757-770 (2000)
• [文献書誌] Tsuchiya.M.,Maeda,K.,E F.Sato.,Ohnishi Y.,Shindo,M.,Asada,A.,Inoue,M.: "Propofol versus midazolam regarding their antioxidant activities"Am.J.Res.Criti.Car.Med.. 163・. 1-6 (2001)
• [文献書誌] Goto,T.,Kono,T.,Ishii,M.,Sato.E.F.: "Supressive effects of cyclosporin A and FK-506 on superoxide generation in human polymorphonuclear leukocytes primed by TNF-a"J.Invest.Dermatol.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Tomita,M.,Sato,E.F.,Nishikawa,M.,Yamano.Y.,Inoue.M.: "Nitric oxide regulates mitochondrial respiration and functions of articular chondrocytes"Arthritis & Rheumatism. 44・1. 96-104 (2001)
• [文献書誌] Kira,Y.,Sato,EF.,Inoue,M.: "Association of CU, Zn-SOD with membrane of mitochondria amd peroxisomes"Free Radic.Biol.Med. (in press). (2001)
• [文献書誌] Nishikawa,M.,Nishiguchi.S.,Tamori,A.,Koh,N.,Takeda,T.,Shiomi,S.,Kubo,S.,Hirohashi,K.,Kinoshita,H.,Sato,E.F.,Inoue,M.: "Somatic mutation of mitochondrial DNA in cancerous and noncancerous liver tissue in individuals with hepatocellular carcinoma"Cancer Res. (in press). (2001)
• [文献書誌] Inoue,K.,Jura,M.,Sato,E.F.,Inoue,A.,Kurahashi,S.,Yamagami,S.,Kiriike.N.,Inoue,M.: "Properties of a mutant Cu, Zn-SOD from a Japanesa patient with familiar amyotrophic lateralsclerosis"Brain Res. (in press). (2001)
• [文献書誌] Nishikawa,M.,Nagatomi,H.,Bao-Jun Chang,Sato,E.F.,Inoue,M.: "Targeting superoxide dismutase to renal proximal tuble cells inhibits mitochondrial injury and renal dysfunction induced by cisplatin"Arch.Biochem.& Biophys.. 386・2(in press). (2001)
• [文献書誌] Nishikimi,A.,Kira,Y.,Kasahara,E.,Sato,EF.,Kanno,T.,Utsumi,K.,Inoue,M.: "Tributyltin interacts with thiol groups in adenine nucleotide translocator therby inducing cytochrome c release"Biochem, J. (in press). (2001)