1999 年度実績報告書

E-セレクチン糖蛋白リガンド(gp^<150>)の遺伝子クローニングとその機能の解明

研究課題

研究課題/領域番号	11670147
研究機関	自治医科大学
研究代表者	中村充自治医科大学, 医学部, 講師 (20198237)
キーワード	Sialyl-LeX / E-Selectin / Counter Ligand / Cell Adhesion / Sialomucin Family / O-linked glycoprotein
研究概要	ヒトプレB細胞表面にはシアリルルイス-X(sLeX)糖鎖抗原が強発現し、血管内皮細胞へのE-セレクチン依存性細胞接着に関与している。プレB細胞表面sLeX抗原構造は、どの糖鎖・どの蛋白質にも発現するというものではなく、糖脂質やN-グリコシド型糖鎖には載っておらず、O-グリコシド型糖鎖だけに発現する。しかも、同じO-型糖鎖でも、ほとんど唯一、分子量150kDaの特定糖蛋白質(gp150)上のO-型糖鎖末端に好んで発現する。また、sLeX発現は糖転移酵素を通した糖鎖遺伝子の間接支配を受けるが、プレB細胞の場合、表面sLeX発現レベルは、コア2GlcNAc移転酵素(C2GnT)の律速調節を受けている。我々は、律速酵素C2GnTが好んで作用するこのgp150を、B細胞におけるE-セレクチン糖蛋白リガンドのキャンディデイトと考え本研究を進めているが、現在までのところ次のことを明らかにしつつある。 1.C2GnTによるsLeX発現レベル調節は、扁桃由来のB細胞活性化においても示された。 2.このgp150は、Pasteurella haemolytica 由来のO-sialoglycoproteinendopeptidase処理によって、抗sLeXモノクローナル抗体反応性が低下したことから、シアル酸を末端に持つO-型糖鎖に富んだシアロムチンタイプの糖蛋白質分子の一つであることが示唆された。 3.強力な発現ベクターpEF/BOSでドライブし、ホスト細胞293Tを用いて産生させたE-セレクチンーIg融合蛋白質を大量に調製して、アフィニティーカラムを作製した。また、抗sLeXモノクローナル抗体を結合させたアフィニティーカラムも調製した。これらを用いて、プレB細胞株NALL-1膜画分から、を均一にまで精製した。現在、ペプチドフラグメントを精製してアミノ酸一次構造を解析中である。

研究成果
(10件)

すべてその他

すべて文献書誌 (10件)

[文献書誌] Nakamura M.: "Simultaneous Core2 B1→6N-Acetylglucosaminyltransferase Up-regulation and Sialyl-Le^x Expression During Activation of Human Tonsillar B Lymphoayt"FEBS Latt.. 463. 125-128 (1999)
[文献書誌] Kikuchi J.: "Induction of Ubiquitin-conjugating Enzyme by Aggregated Low Density Lipoprotein in Human Macrophages and Its Implications for Atherosclerosis"Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.. 20(1). 128-134 (2000)
[文献書誌] Nakamura M.: "UDP-GlcNAc : GolB1→3GalNAc(GlcNAc to GalNAc)B1→6N-Acetylglucosaminyltransfer Holds a Key Role on the Control of CD15s Expression in Human Pre-B Lymphoid Cell Lines"Glycobiology. 9(1). 1-12 (1999)
[文献書誌] Furukawa Y.: "Transcriptional Repression of the E2F-1 Gene by Interferon-α Is Mediated through Induction of E2F-4/pRB and E2F-4/p130 Complexes"Oncogene. 18(11). 2003-2014 (1999)
[文献書誌] Iwase S.: "Defective Binding of IRFs to the Initiator Element of Interleukin-1β-Converting Enzyme(ICE)Promotor in an Interferon-resistant Dardi Subliu"FEBS Lett.. 450(3). 263-267 (1999)
[文献書誌] Yang W.: "Two-step Spreading Mode of Human Glioma Cells on Fibrin Monomer via a β1 Integnin"Thromb Res.. 93(6). 279-290 (1999)
[文献書誌] 中村充: "接着分子シアリルLewis-Xの発現調節"臨床免疫. 31(5). 619-622 (1999)
[文献書誌] 中村充: "ミニレビュウ白血球細胞分化と表面糖鎖生合成制御"生化学. 72(6)(印刷中). (2000)
[文献書誌] 中村充: "生物薬科学実験講座第1巻生体構成成分と高分子"広川書店(東京)(印刷中). (2000)
[文献書誌] 中村充: "医学大辞典"医学書院(東京)(印刷中). (2000)

1999 年度 実績報告書

E-セレクチン糖蛋白リガンド(gp^<150>)の遺伝子クローニングとその機能の解明

研究代表者

中村 充 自治医科大学, 医学部, 講師 (20198237)

研究成果

[文献書誌] Nakamura M.: "Simultaneous Core2 B1→6N-Acetylglucosaminyltransferase Up-regulation and Sialyl-Le^x Expression During Activation of Human Tonsillar B Lymphoayt"FEBS Latt.. 463. 125-128 (1999)

[文献書誌] Kikuchi J.: "Induction of Ubiquitin-conjugating Enzyme by Aggregated Low Density Lipoprotein in Human Macrophages and Its Implications for Atherosclerosis"Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.. 20(1). 128-134 (2000)

[文献書誌] Nakamura M.: "UDP-GlcNAc : GolB1→3GalNAc(GlcNAc to GalNAc)B1→6N-Acetylglucosaminyltransfer Holds a Key Role on the Control of CD15s Expression in Human Pre-B Lymphoid Cell Lines"Glycobiology. 9(1). 1-12 (1999)

[文献書誌] Furukawa Y.: "Transcriptional Repression of the E2F-1 Gene by Interferon-α Is Mediated through Induction of E2F-4/pRB and E2F-4/p130 Complexes"Oncogene. 18(11). 2003-2014 (1999)

[文献書誌] Iwase S.: "Defective Binding of IRFs to the Initiator Element of Interleukin-1β-Converting Enzyme(ICE)Promotor in an Interferon-resistant Dardi Subliu"FEBS Lett.. 450(3). 263-267 (1999)

[文献書誌] Yang W.: "Two-step Spreading Mode of Human Glioma Cells on Fibrin Monomer via a β1 Integnin"Thromb Res.. 93(6). 279-290 (1999)

[文献書誌] 中村充: "接着分子シアリルLewis-Xの発現調節"臨床免疫. 31(5). 619-622 (1999)

[文献書誌] 中村充: "ミニレビュウ白血球細胞分化と表面糖鎖生合成制御"生化学. 72(6)(印刷中). (2000)

[文献書誌] 中村充: "生物薬科学実験講座 第1巻生体構成成分と高分子"広川書店(東京)(印刷中). (2000)

[文献書誌] 中村充: "医学大辞典"医学書院(東京)(印刷中). (2000)

1999 年度実績報告書

中村充自治医科大学, 医学部, 講師 (20198237)

[文献書誌] 中村充: "生物薬科学実験講座第1巻生体構成成分と高分子"広川書店(東京)(印刷中). (2000)