| 研究概要 |
本研究では、手術摘出されたヒト未分化型胃癌でploidy解析を行い、DNA-diploidの腫瘍細胞にcomparative genomic hybridization(CGH)を適用し、未分化型胃癌の早期に起こるゲノムDNAの変化を明らかにしようとした。しかし、間質成分の多い未分化型胃癌では、Laser capture microdissectionによっても、間質細胞や炎症細胞の除去と腫瘍細胞の十分なenrichmentは困難を極めた。単離細胞のsuspensionを薄くスメアに引いてから腫瘍細胞をcaptureすることも試みたが、スメアではフィルムへの接着が悪く、更なる工夫が必要であることが分かった。そこで、研究期間中に、CGHによる染色体の初期変化の解析の方法論を確立するために、細胞単離の容易な食道癌を用いて基礎的な検討を行った。具体的には、腫瘍病巣より採取しploidyを決定した多数箇所のサンプルから、DOP-PCRによる微量検体からの全ゲノム増幅、DOP-PCRによるプローブの蛍光標識条件のoptimization、DOP-PCRで作成した標識プローブによるCGHを行い、良好なCGHの結果を得ることができた。特にプローブの標識条件を割り出すのにかなりの試行錯誤を要した。CGHのG/R比のshift dis-tanceとploidy modeから,変化した染色体部分の絶対的コピー数を求め、そのデータをもとに、複数のゲノムの変化の時間的前後関係を推定するtemporal analysisの方法論は、培養細胞を用いて確立した(Okada et al.,2000)が、本研究によって、それをin vivoの原発腫瘍の多数箇所のサンプルに応用し、個々の腫瘍に固有の染色体変化のsequenceを明らかにすることができた。この結果は現在投稿中である。
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