| 研究概要 |
ACTH受容体蛋白質から15アミノ酸配列を2ヶ所を選び,合成ペプチドを作製し,KLHをキャリアー蛋白としてMBS法で,コンジュゲーションし,家兎4羽に免疫した.抗血清はELISA法で,各々のペプチド抗原に対し25600倍希釈で陽性で,人副腎2例のパラフィン切片を用い,希釈倍率の検討およびantigen retrievalの方法を検討し,1血清は副腎皮質の細胞膜に,陽性となった.ウェスタンブロット法で副腎のホモジネートと60kDのバンドを形成し,ペプチドにより吸収された.
副腎皮質癌10例,腺腫24例,過形成8例のパラフィン切片を用いて免疫染色した.PCNA,Ki-67陽性率は,癌で3.43-20.08,0-20.9と高値で,腺腫で0.14-1.33,0-1.03と低く,過形成で0.19-0.7,0-0.05でさらに低い傾向を示し,生物学的悪性度と増殖能の相関が明らかであり,増殖能との関連で,アポトーシスを検討すると,むしろ癌で多く見られ.Fas,Fas-lgandとの関連が一部では見られた.ACTHR抗体では,腺腫や過形成に比較し,癌は陽性率が低下している.p53は腺腫や過形成では陰性,癌で3例のみ陽性,p53と副腎癌の発癌との関連が考えられるが,3例のみであり,発癌には他の多数の因子の関与が考えられる.Rasは全体に陰性であった.Mycは,抗体9E11では,非腫瘍部に陽性で,腫瘍部は大部分陰性だったが,他の抗体9E10では,正常副腎皮質は核のみ陽性で,過形成や腺腫も核が陽性で,一部胞体も陽性だが,癌では胞体が優位に染色されている.
3ヶ所の塩基配列を選択し,ATTを5個付加した60merのオリゴDNAプローブを合成し,dot blot hybridizationで10pgまで検出できた.ピロニン染色や28s r RNA゛でRNAが保存されていることを確認した人副腎のパラフィン切片を用い,種々の条件を,T-T dimer法にて染色して検討した.球状帯と束状帯のcompact cellに陽性像を認めるが,弱く,定量的に検討するためにより強い染色を得る必要があり,別の二ヶ所の塩基配列を選択し,ジゴキシゲニン標識を検討している.
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