| 研究課題/領域番号 |
11670216
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
上中 明子 岡山大学, 医学部, 助手 (50273967)
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| 研究分担者 |
小野 俊朗 岡山大学, 医学部, 助手 (50185641)
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| キーワード | マウス骨髄腫MOPC-70A / 細胞傷害性T細胞(CTL) / 発現クローニング / 抗原遺伝子 / 標的エピトープ / 抗原提示分子 |
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| 研究概要 |
1. CTLの反応特異性と抗原提示分子の解析
マウス骨髄腫MOPC-70A担癌BALB/cマウス脾細胞より樹立した細胞傷害性T細胞(CTL)バルク株、および、CTLクローンの反応特異性の解析から、これらのCTLは、調べた骨髄細胞、脾細胞、リンパ節細胞などの正常細胞や、他の骨髄腫、白血病など種々の腫瘍細胞とは反応せずMOPC-70A特異的に反応することが判明した。
2. 発現クローニング法による抗原遺伝子のクローニングとその塩基配列の決定
MOPC-70AmRNAからcDNAライブラリーを作製し、マウスH-2遺伝子を導入したCOS7細胞に形質導入し、発現クローニング法によるスクリーニングを行った。その結果、MOPC-70A特異的CTLクローンE10を活性化し、TNFおよび、IFN-γの産生を誘導するクローンを得た。また、得られた遺伝子の塩基配列の解析から、抗原遺伝子はアポトーシス誘導因子(AIF)であることが判明した。
3. CTL標的エピトープの検索
抗原遺伝子の塩基配列をもとに欠質遺伝子(deletion mutant)を作成し、それらを、COS7細胞に形質導入し発現させ、CTLクローンE10の活性化を指標に標的エピトープをコードする遺伝子の領域しぼり込みを行った。その結果をもとに、各種の推測されるペプチドを合成し、COS7細胞への感作試験を行い、10個のアミノ酸DLGPDVGYEAからなるペプチドが標的エピトープとなっていることを明らかにした。
4. 抗原提示分子の検索
標的エピトープはCOS7細胞上にも提示されることがわかり、現在、COS7細胞およびMOPC-70A細胞の抗原提示分子を検索中である。
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