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平成12年度研究成果
1.CTLの反応特異性と抗原遺伝子の同定
マウス骨髄腫MOPC-70A担癌BALB/cマウス脾細胞より腫瘍特異的細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立した。腫瘍特異的CTL認識抗原を同定するために、MOPC-70A細胞mRNAからcDNAライブラリーを作製し、マウスH-2遺伝子を導入したCOS7細胞に形質導入し、発現クローニング法によるスクリーニングを行った。その結果、MOPC-70A特異的CTLクローンE10を活性化し、TNFおよび、IFNγの産生を誘導する1398bpのクローンを得た。また、得られた遺伝子の塩基配列の解析から、抗原遺伝子は、マウスアポトーシス誘導因子(mAIF)であることが判明した。
2.CTL標的エピトープの検索
抗原遺伝子の塩基配列をもとに欠質遺伝子(deletion mutant)を作成し、COS7細胞に形質導入し、CTLクローンE10の活性化を指標に検索し、標的エピトープをコードする遺伝子の領域は737bp〜870bpにあることを明らかにした。この結果をもとに、各種の推測されるペプチドを合成し、COS7細胞への感作試験を行い、10個のアミノ酸DLGPDVGYEAからなるペプチドが標的エピトープとなっていることを明らかにした。
3.抗原提示分子の検索
標的エピトープはCOS7細胞に提示されることがわかり、現在、COS7細胞およびMOPC-70A細胞のcDNAライブラリーを作成し、抗原提示分子について発現クローニング法による検索を行っている。
4.ELISPOT発現クローニング法の開発
抗原遺伝子および抗原提示分子の検索にあたって、今回スクリーニング効率の高いELISPOT発現クローニング法を開発した。
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