クニッツ型セリンプロテアーゼインヒビターによる増殖因子活性調節に関する研究

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670221
• 研究機関: 宮崎医科大学
• 研究代表者: 伊藤 浩史 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (80253847)
• 研究分担者: 片岡 寛章 宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (10214321)
• キーワード: HGF / HGF activator / HGF activator inhibitor / Kunitz<SUP>-< / SUP>type inhibitor / Knock out mouse

研究概要

肝細胞増殖因子活性化因子(Hepatocyte Growth Factor Activator,HGFA)は肝細胞増殖因子(HGF)を特異的に活性化させるセリンプロテアーゼで、その活性調節因子であるHGF activator inhibitor type-1(HAI-1)及びtype-2(HAI-2)とともに東京工大の喜多村らのグループによって発見された蛋白である。本研究ではHGFA,HAI-1,HAI-2遺伝子欠損マウスを作製し、生体内でのこれらの蛋白の機能解析とともに、Kunitz型インヒビターのインヒビターとしての作用以外の本来の機能を明らかにすることを目的としている。
すでにマウスHGF Activator,HAI-1,HAI-2 cDNA及びGenomic DNAをクローニングしたので、今年度はクローン化したマウスHGFA,HAI-1,HAI-2 genomic DNAにmutationを加え、遺伝子を不活化したtargeting vectorを作製し、第一段階として、熊本大学動物資源センターの山田源教授らのグループの協力を得て、ES細胞にエレクトロポレーション法によりHGFAのTargeting vectorの導入を行なった。相同組み替え体をポジティブネガティブ選択法によって選別、8細胞胚に注入した後、偽妊娠マウスに移植しキメラマウスを得た。さらにC57BL/6マウスと交配しヘテロマウスを得て、十数匹のホモ欠損マウスを作成した。また、HAI-1,HAI-2遺伝子についてもgenomic DNAにmutationを加えたTargeting vectorを作成し、ES細胞へのエレクトロポレーションを熊本大学に依頼した。

研究成果

• [文献書誌] Itoh,H.,Kataoka,H.,Tomita M,Hamasuna R,Nama Y,Kitamta N,Kono M: "Up-regulation of hepatocyte growth factor activator inhibitor type-1 but not type-2 along with regeneration of intestinal mucosa."Am. J. Physiol.. 278. G635-G643 (2000)
• [文献書誌] Itoh H,Hamasuna R.Karaoka H Yamouchi M,Miyazawa K,Kitanma N,Koono M: "Mouse hepatocyte growth factor activator gene : its expression not only in the liver but also in the gastrointestinal tract"Biochim. Biophys. Acta. 1491. 295-302 (2000)
• [文献書誌] Itoh H,Yamauch M,Kataoka H,Hamasuna R,Kitamura N,Koono M: "Genomic structure and chromosomal localization of the human hepotocyte growth factor activator inhibitor type 1 and 2 genes."Eur. J. Biochem.. 267. 3351-3359 (2000)
• [文献書誌] Kataoka H,Hamasuna R,Itoh H Kitamura N,and Koono M: "Activation of hepatocyte growth factor/scatter factor in colo rectal carcinoma"Cancer Res.. 60. 6148-6159 (2000)
• [文献書誌] Kataoka H,Shimamura T,Kawaguchi T,Hamam R,Itoh H,Miyazawa K,Kitamura N,Koono M: "Hepatocyte growth factor activaor inhibitor type 1 is a specific cell surface binding protein of hepatocyte growth factor activator (HGFA) and regulates HGFA activity in puricellular microenvironment"J. Biol. Chem.. 275. 40453-40462 (2000)
• [文献書誌] Kataoka H,Mzon JY.Itoh H,Hamaiunc R Shimamura T,suganuma T Koono M: "Localization of hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1 in Largerhans' cells of human placenta."histochem, Cell Biol.. 114. 469-475 (2000)