| 研究概要 |
hlyAの正の制御遺伝子hlyUの遺伝子内部をスーサイドベクターにクローン化したものを用いコレラ菌に導入し、single crossoverによりhlyUを破壊した変異株を分離したが、ごく一部の株では溶血性が若干低下がみられたが、大多数の株では溶血性の低下は見られなかった.このことから、hlyUが正の制御遺伝子であるということはすべての溶血株で見られる現象ではなく、hlyU以外にも別の制御遺伝子ある可能性が示唆された。
一方,新たに溶血素産生を制御する未知の遺伝子を検索すべく全DNAの約600bp断片をスーサイドベクターにクローン化し,コレラ菌N86株に導入し,挿入変異株約3000コロニーについて溶血性を調べたところ,血液寒天平板上で溶血性が低下したIM1株,IM2株の2株の変異株を得た.このうちIM1は血液寒天平板培地で完全に溶血性が失われていたがIM2は溶血性の低下は見られたが,完全には失われていなかった.挿入部位の塩基配列をTIGRのコレラ菌ゲノムデータベース検索したところ,プラスミドはヘモリジン構造遺伝子の上流約2kbに存在する大腸菌の多剤耐性遺伝子と相同性を有するemrDの遺伝子内部およびその上流に存在する意義不明のOpen Reading Frameに挿入されていた.また,IM1,IM2のmRNAレベルでの発現を調べたところ,IM1では発現が見られたもののIM2では発現は全く見られなかった.これらのことから,emrDもしくはその上流に存在するORFが溶血性に関与することが強く示唆された.
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