NK細胞活性化制御機構の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670312
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 瀧 伸介 千葉大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50262027)
• 研究分担者: 山崎 晶 千葉大学, 大学院・医学研究科, 助手 (40312946)
• キーワード: NFAT / retrovirus / library / NK細胞 / リンパ球活性化分子 / シグナル伝達分子 / expression cloning / レポーター遺伝子

研究概要

本研究はNK細胞の活性化に関わる分子を明らかにする目的で、転写因子NFATを活性化する分子の探索を行った。方法として、NFAT-GFPレポーター遺伝子を導入した指示細胞株に、CD8とのキメラ分子として発現するように設計したレトロウィルスcDNAライブラリーを導入し、該細胞を抗CD8抗体で刺激した際にレポーター(GFP)を発現する細胞クロンをセルソーターによって単離する手法(NFAT-activator cloning system)を新たに開発し、これを用いた。脾臓細胞のcDNAライブラリーを導入した指示細胞のうち刺激後GFP陽性となる細胞を、3-4回ソーティングを繰り返し、最終的に限界希釈法によってクロンを得た。それぞれの細胞に導入されているcDNAを解析すると、既存のNFAT活性化分子以外に数種の新規分子が同定された。この一連の分子をNFAT activating Molecule(NFAM)と命名し、その機能の解析を開始した。まず、最初の分子NFAM1は、その全長cDNAを単離、配列を決定したところ細胞表面に発現される分子としての特徴を備えていた。さらに、細胞内部位にITAM様の配列YxxLx(7-8)YxxMが認められた。本ITAM様配列が、NFAT活性化に関与しているか否かを明らかにするため、ITAM様部位のチロシン(Y)をフェニルアラニンに置換し、T細胞ハイブリドーマに導入したところ、野生型NFAM-1とは対照的に、活性化シグナルを伝えなくなることから、確かにこのITAM様配列がNFAM1のシグナル伝達に必須の領域であることが判明した。

研究成果

• [文献書誌] Arase,H.: "Negative regulation of expression and function of Fc γ RIII byCD3 ζ in murine NK cells."J.Immunol.. 166. 21-25 (2001)
• [文献書誌] Arase,H.: "The quantity of TCR signal determines positive selection and lineage commitment of T cells."J.Immunol.. 166. 6252-6261 (2000)
• [文献書誌] Arase,H.: "Regulation of cell surface expression of CTLA-4 by secretion of CTLA-4-containing lysosomes upon activation of CD4^<(+>T cells."J.Immunol.. 165. 5062-5068 (2000)
• [文献書誌] Arase,H.: "Immune complex and Fc receptor-mediated augmentation of antigen presentation for in vivo Th cell responses."J.Immunol.. 164. 6113-6119 (2000)
• [文献書誌] Arase,H.: "A Di-leucine signal in the ubiquitin moiety. Possible involvement in ubiquitination-mediated endocytosis."J.Biol.Chem.. 276. 26213-26219 (2000)
• [文献書誌] Arase,H.: "CD8^+ T cell-mediated skin disease in mice lacking IRF-2, the transcriptional attenuator of interferon-α/β signaling."Immunity. 13. 643-655 (2000)