T細胞レセプター・シグナル伝達における糖脂質濃縮膜画分(GEM)の機能解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670319
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 小杉 厚 大阪大学, 医学部, 助教授 (90186685)
• キーワード: T細胞 / TCRシグナル伝達 / GEM / LAT / SHP-1 / フォスファターゼ

研究概要

研究代表者は、TCRシグナル伝達における糖脂質濃縮細胞膜画分(GEM)の重要性を報告してきた。今年度は、TCRからの初期シグナルがGEMにおいてどのように制御されているのかに関して以下の研究を行った。
TCRシグナル伝達に抑制的に働くことが知られているフォスファターゼを選択的にGEMに集積させ、これによってTCRシグナル伝達が影響を受けるかどうかを検討した。具体的には、アダプター分子であるLATのGEMへのtragetting sequenceの部分と、TCRシグナル伝達を負に制御することで知られているフォスファターゼ、SHP-1とを連結させた融合遺伝子を作製し、これを過剰に発現させたT細胞株を樹立し様々なTCRシグナル伝達反応を解析した。その結果、LAT/SHP-1をJurkat細胞に導入するとTCRシグナル伝達が著明に抑制された。一方、膜には局在するがGEMには局在しない変異体(LAT(CA)/SHP-1)や、GEMには局在するがフォスファターゼ活性のない変異体(LAT/SHP-1(CS))を導入してもTCRシグナル伝達の抑制は見られなかった。従って、活性型フォスファターゼをGEMへ集積させるとGEMでのリン酸化反応が抑制され、その結果TCRシグナル伝達が抑制されるものと考えられた。
以上より、GEMでのリン酸化反応がTCRシグナル伝達に重要であり、この反応がGEMで抑制されればその後のシグナル伝達が障害を受けることが示された。

研究成果

• [文献書誌] Ogata M.et al.: "Inactivation of Mitogen-Activated Protein Kinases by a Mammalian Tyrosine-specific Phosphatase, PTPBR7"Biochm. Biophys. Res. Commun.. 265. 52-56 (1999)
• [文献書誌] Ogata M.et al.: "Effects of overexpression of PTP36, a putative protein tyrosine phosphatase, on cell-adhesion, cell-growth, and cytoskeletons in HeLa Cells"J. Biol. Chem.. 274. 12905-12909 (1999)
• [文献書誌] Ogata M.et al.: "Regulation of phosphorylation level and distribution of PTP36, a putative protein tyrosine phosphatase, by cell-substrate adhesion"J. Biol. Chem.. 274. 20717-20724 (1999)
• [文献書誌] Kosugi A.et al.: "Translocation of tyrosine-phosphorylated TCRS chain to glycolipid-enriched membrane domains upon T cell activation"Int. Immunol.. 11. 1395-1401 (1999)
• [文献書誌] Oh-hora M.et al.: "Direct suppression of TCR-mediated activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) by leukocyte PTP (LC-PTP), a tyrosine-specific phosphatase"J. Immunol.. 163. 1282-1288 (1999)
• [文献書誌] Kosugi A.et al.: "The process of GEM/Raft-mediated lymphocyte activation"Rec. Res. Dev. Immunol.. (in press).