ヒト肝細胞におけるC型肝炎ウイルスレセプターの同定と感染制御

2001 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 11670478
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 光井 洋 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (30239280)
• 研究分担者: 前川 久登 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (10301102) ; 丸山 稔之 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (30219571)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• キーワード: C型肝炎ウイルス / ウイルスレセプター

研究概要

C型肝炎ウィルス(HCV)の外側のエンベロープ蛋白(E1、E2)の培養細胞での発現系を構築し、部分精製を試みた。
まずジェノタイプ1b型でウイルス量の多い患者血清よりC型肝炎ウイルスのRNAを抽出した。そのRNAより、逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、特異的プライマーを用いてPCRをおこなうことでE1、E2遺伝子を増幅し、発現ベクターに組み込んだ。シークエンスを確かめた後、6xHisTagをつけたエンベロープ蛋白(E1、E2)をCOS7細胞に導入して、抗体でその発現を確認した。E2蛋白のうちC末を削ったアミノ酸661までのもののみが分泌型であり、6His-TagによりNiカラムとのaffinityで部分精製できた。現在ヒト肝ライブラリーを使い、結合蛋白の発現スクリーニングをおこなっている。またHCVのレセプターの候補分子として報告されたCD81に関しては、ヒト遺伝子をlibraryよりPCRでクローニングし、発現ベクターに組み込んだ。COS7細胞に導入した後、細胞表面への発現をFACscanと免疫染色により確認した。このヒトCD81発現COS7細胞に、ウイルスの存在する血清を加えて培養した。
時間経過を追って細胞とその上清についてRT-PCRを用いでHCVのマイナス鎖の検出を試みたが、現在のところ再現性のある有意な所見は得られていない。HIVと同様なco-receptorが存在する可能性等があるものと思われる。

研究成果

• [文献書誌] Mitsui H, Takuwa N, Maruyama T, et al.: "The MEK1-ERK MAP kinase pathway and the PI 3-kinase-Akt pathway independently mediate anti-apoptotic signals in HepG2 liver cancer cells"Int J Cancer. 92. 55-62 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hirayama M, Maruyama T, Mitsui H, et al.: "IgG1 anti-P2 as a marker of response to interferon in patients with chronic hepatitis C"Clin Exp Immunol. 126. 92-100 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Maruyama T, Mitsui H, Maekawa H, et al.: "Emergence of the precore mutant late in chronic hepatitis B infection covelates with the severity of liver injury and mutation in the col region"Am J Gastroenterol. 95. 2894-2904 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Mitusi H, Takuwa N, Maruyama T, et al.: "The MEK1-ERK MAP kinase pathway and the PI 3-kinase-Akt pathway independently mediate anti-apoptotic signals in HEPG2 liver cancer cells"Int J Cancer. 92. 55-62 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hirayama M, Maruyama T, Mitsui H, et al: "IgG anti-P2 as a marker of response to interferon in patients with chronic hepatitis C"Clin Exp Immunol. 126. 92-100 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Maruyama T, Mitsui H, Maekawa H, et al: "Emergence of the precore mutant late in chronic hepatitis B infection correlates with the severity of liver injury and mutations in the core region"Am J Gastroenterol. 95. 1994-1998 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より