| 研究課題/領域番号 |
11670492
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
高瀬 幸次郎 三重大学, 医学部, 助教授 (00163204)
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| 研究分担者 |
古坂 明弘 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (00266678)
白木 克哉 三重大学, 医学部, 助手 (90263003)
伊藤 正明 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| キーワード | HCV / hepatoma / two-hybrid |
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| 研究概要 |
本年度はまず研究計画に従い以下の結果を得た。
HCVコア蛋白の標的蛋白質の検索
C型肝炎患者のHCV遺伝子をクローニングしコア領域の遺伝子を解析した。そのHCVコア遺伝子をpAS-2ベクターに組み込み、その結果蛋白をヒトリンパ球cDNAライブラリーより、yeastを用いたtwo-hybrid法を用いて現在クローニング中である。いくつかの陽性クローンを確認している。さらに、コア蛋白のC末端を欠損させたvectorを作成し同様にtwo-hybrid法にて陽性クローンのスクリーニングを施行している。現在まで約30個のクローンを同定した。
これらのクローンの解析にて、免疫やアポトーシスに関する新たな遺伝子のクローンの同定に成功している。その一つがTIMP-1(tissue inhibitor of metalloprotease-1)であった。TIMP-1は慢性肝炎における肝線維化、および肝発癌にも深く関係しているとされている。
そこで、次にTIMP-1とHCVコア遺伝子のin vitroでの結合を確認するために、それぞれのvectorのdelection mutantを作成し結合確認実験中である。このvectorを用い、免疫沈降法にて結合を確認している。また、リコンビナント蛋白を作成しpull down assayにても結合を確認しさらに、再現性を確認中である。また、現在までHCVコア蛋白発現Tgマウスでは、刺激なしには、発癌はみられていない。
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