|
悪性胸膜中皮腫を対象とした遺伝子治療を行ううえで、腫瘍特異的プロモーターを応用することを目的に以下の研究を行った.ヒト悪性胸膜中皮腫細胞株(H28、H2052、211H)、子宮頚癌細胞株(Hela)を培養し用いた.Keratin19の発現はNorthem blot analysisで検討した.次にKeratin19のプロモーター領域(260bp)にエンハンサー領域(80bp)を連結した上でルシフェラーゼ用レポーテイングベクターにサブクローニングし(pK19-LUC)、ヒト悪性胸膜中皮腫細胞株を含む各細胞株に遺伝子導入を行いルシフェラーゼ活性を測定した.Keratin19を発現する悪性胸膜中皮腫細胞(H28、H2052)においては、pK19-LUCを導入後比較的強いルシフェラーゼ活性を示したのに対して、Keratin19を発現しない細胞(211H)においてはきわめて弱いルシフェラーゼ活性のみを認めた.同様の検討を悪性胸膜中皮腫に特異的に発現するとされるCa結合タンパクであるCalretininのプロモーターを用いて行った.Calretininの発現はRT-PCR法により確認した.CALのプロモーター領域のうち転写開始点より上流2.2kbをレポーテイングベクターにサブクローニングし各細胞に遺伝子導入後ルシフェラーゼ活性を測定したところ、CALを発現する細胞(H2052、211H)において比較的比較的強いルシフェラーゼ活性を示した.さらにこれらのプロモーターの下流にHerpes simplex virus thymidine kinase(TK)遺伝子を結合した発現ベクターを作製した。この発現ベクターをリポフェクション法により遺伝子導入したところ、特異的にGanciclovir(GCV)による抗腫瘍効果を認めた。
|
