慢性肉芽腫症遺伝子治療の基礎的研究;MND-gp91ベクターの作成

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670768
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 布井 博幸 熊本大学, 医学部, 助教授 (50218260)
• キーワード: 慢性肉芽腫症遺伝子治療 / MIND-gp91ベクター / Ha-MDR-IRES-gp91ベクター / MFGS-gp91 / 239・SPAベクター / 病型分類 / 遺伝子解析

研究概要

本年度は、MND-gp91プラスミドをPAMP51 producer細胞にトランスフェクションし、臨床応用可能なくらい高いウイルスタイターのレトロウイルスベクターをクローニングしてきており、数クローンのウイルスを選別してきている。 さらに、これらのウイルスベクターとこれまで開発してきた慢性肉芽腫症遺伝子治療のためHa-MDR-IRES-gp91およびMFGS-gp91レトロウイルスベクターと比較しながら、その有用性を以下の点で、検討を始めている段階である。 即ち患者由来B細胞を標的として、これらのレトロウイルスベクターによる染色体への遺伝子導入、蛋白発現および機能再構築を確認し、一方で、ウイルスプロモータのメチル化により蛋白表現が弱くなる可能性が示されてきているので、今回メチル化が起こりにくく改変されたMND-gp91レトロウイルスベクターが、より安定した、しかも蛋白発現効率のよい遺伝子治療用ベクターであるかどうか比較したいと考えている。
同時にgp91-phoxノックアウトマウスとヒト造血幹細胞への遺伝子導入法を種々のサイトカインと組み合わせ刺激で試みており、末梢血B細胞と比較検討する準備をしている。 この様な基礎的検討のもと第一段階として、MFGS-gp91/239・SPAを用いて臨床遺伝子治療を計画している。
また、本年度は日本における慢性肉芽腫症患者の病型分類とgp91-phox,p22-phox欠損型患者の遺伝子解析を行し、そのまとめがHuman Geneticsに採択されたところである。

研究成果

• [文献書誌] Tsuchiya T.: "Uncompetitive inhibition of superoxide generation by a synthetic peptide corresponding to a predicted MADPH binding site in gp91 phox, a component of the phagocyte respiratory oxide."Biochemi.Biophys.Res.Comm.. 257・1. 124-128 (1999)
• [文献書誌] Izuhara K: "Association of the interleukin-4 receptor alpha chain with p47phox,an activator of the phagocyte NADPH oxidase in B cells"Molecular Immunol. 36・1. 45-52 (1999)
• [文献書誌] H.Nunoi: "A heterozygous mutation of -actin associated with neutrophil dysfunction and recurrent infection"Proc.Natl.Acad.Sci.. 96. 8693-8698 (1999)
• [文献書誌] H.Koga: "Tetratricopeptide Repeat(TPR) Motifs of p67phox Participate in Interaction with the Small GTPase Rac and Activation of the Phagocyte NADPH Oxidase."J.Biol.Chem. 274. 25051-25060 (1999)
• [文献書誌] Nunoi H: "Gene therapy for inherited diseases using hematopoietic stem cells -Gene therapy ofr patients with chronic granulomatous dissease-"Human cell. 12. 103-108 (1999)
• [文献書誌] Ishibashi F.: "Statistical and mutational analysis of chronic granulomatous diesease with gp91- and p-22phox deficiency in Japan"Blood. (accepted).