electroporationを用いた血管に対する遺伝子治療の基礎研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670888
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 松本 真一 神戸大学, 医学部, 助手 (10229552)
• 研究分担者: 廣田 省三 神戸大学, 医学部・附属病院, 助教授 (20181216)
• キーワード: electroporation / 遺伝子治療

研究概要

(目的)
electroporationを用いた生体への遺伝子導入を容易かつ反復して施行可能とし,最終的に血管への遺伝子導入の効率を高める方法を開発するための基礎実験とする。
(方法)
経皮的に生体に挿入可能なelectroporation needleを作成し,家兎の大腿筋肉に遺伝子を導入した。electroporation needleは1cm間隔の2本の22G針を外套とし,その中にelectroporation電極を挿入,さらに2本の外套針の中央に遺伝子注射針をセットし作製。外套を筋肉内に挿入し,さらに電極を挿入,遺伝子注入直後にelectroporationを施行する。
基礎検討として,遺伝子はgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を使用。家兎6羽の大腿筋肉にelectroporation needleを挿入。GFP遺伝子50μg注入後に50V,50ms間隔で高周波パルス計6回(後半半分はリバースモード)でelectroporation施行。3日後に,遺伝子導入筋肉の凍結切片を作製,蛍光顕微鏡下に観察し,遺伝子の導入を確認した。
(結果)
挿入されたelectroporation needle間に一致した遺伝子発現が確認された。