薬剤耐性発現機構と温熱療法における制癌剤増強機構の分子レベルでの解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670890
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 川崎 祥二 岡山大学, 医学部, 教授 (20034952)
• キーワード: 制癌剤 / アルキル化剤 / MGMT / メチル化 / 多剤耐性

研究概要

制癌剤に対する耐性を不す細胞では多剤耐性遺伝子としてMDR1、MDR2遺伝子の発現が増強していることが示され、これらの遺伝子はイオンチャンネルと関連していることを明らかにした。一方、制癌剤に対する耐性は他にもいくつかの機構が存在することが報告されている。著者らは癌細胞のアルキル化剤に対する感受性に06-methylguanine-DNA methyltransferase(MGMT)が関連しているかどうかについて検討をした。著者らは、いくつかのヒト悪性腫瘍細胞株を用いて、メチル化によるMGMTの発現低下がアルキル化剤の効果に影響を受けるかかどうかを検討した。まず、ヒト悪性腫瘍細胞株7株で、アルキル化剤MNUへの感受性について、生存率から耐性株と感受株に分類した。さらに、プロモーター領域についてTa cloningを行い、bisulfate sequencingを行った.Sequencingの結果、耐性株では、プロモーター下流および第一エクソン内にメチル化を認めた。それに加え、感受株では、プロモーター上流にもメチル化を認めた。以上のことから、プロモーター下流および第一エクソン内のメチル化以上に、プロモーター上流のメチル化がアルキル化剤への細胞の感受性を反映している可能性を明らかにした。その上、各細胞でのMGMT発現についてRT-PCRを行った結果、プロモーター上流にメチル化が認められた群では、MGMT発現が低化していることを認めた。

研究成果

• [文献書誌] Asaumi J, Higuchi Y, Matsuzaki H, Murakami J, Kawasaki S et al.: "Thermochemotherapy of a human salivary adenocarcinoma cell line"Oncol Rep. 9. 365-369 (2002)
• [文献書誌] Shibuya K, Kawasaki S et al.: "Effect of wortmannin on the suppression of thermotolerance in tsAF8 cells"Oncol Rep. 9. 81-84 (2002)
• [文献書誌] Ando Y, Kuroda M, Kawasaki S et al.: "The effect of calcium on Fas-mediated apoptosis and secondary necrosis of Jurkat cells"Int J Mol Med.. 7. 243-247 (2001)
• [文献書誌] Kawasaki S, et al.: "Thermotherapy for Neoplasia, Inflamation, and Pain"Springer. 424-432 (2001)