研究概要 |
FMEVタイプのベクターを、効率良くヒト造血幹細胞へ導入できることを確認するために、以下のことを行った。 (1)ストローマ細胞株を用いた、新たなアンフォトロピック・パッケージング細胞株を樹立した。また、ギボン白血病ウイルス(GALV)のenv蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生するパッケージング細胞株を樹立した。水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生させるために、水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白の発現ベクターを作成した。 (2)ヒト臍帯血よりCD34+/CD38-分画を調整し,この造血細胞の亜分画を標的細胞として、ストローマ細胞を用いた方法で、外来遺伝子を導入した。遺伝子導入後、抗ヒトCD34モノクローナル抗体、抗ヒトCD38モノクローナル抗体、抗マウスCD8 (Lyt-2.2)モノクローナル抗体での三重染色をし、CD34+/CD38-分画での、マーカー遺伝子、マウスCD8、の陽性細胞の出現頻度を測定した。 (3)SRC(SCID-mouse repopulating cell)への遺伝子導入を確認するため、上記のごとく遺伝子導入した細胞をNOD/SCIDマウスに移植した。移植後15週で、ヒト造血細胞がマウスにて再構築されていること、および、これらのヒト由来の細胞に導入遺伝子であるマウスCD8が発現していることを、抗ヒトCD45モノクローナル抗体、抗マウスCD8(Lyt-2.2)モノクローナル抗体での2重染色にて確認した。
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