動脈血管内皮細胞の抗凝固機能の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11671003
• 研究機関: 佐賀医科大学
• 研究代表者: 福留 健司 佐賀医科大学, 医学部, 助手 (50284625)
• キーワード: プロテインC / レセプター / トロンボモジュリン / 血栓 / 血管内皮 / 血液凝固

研究概要

血漿蛋白であるプロテインCの欠損は血栓症の一因となっており、プロテインCのノックアウトマウスは生後24時間以内に重篤な血栓症によって全て死亡する。従って、プロテインCは血液凝固制御にとって必須の分子である。プロテインCはセリンプロテアーゼ前駆体として循環しているが、この状態では生理活性を発揮できない。血液凝固系の作動によって生成されたトロンビンによって血管内皮上で活性化のプロテアーゼに変換されて、はじめて抗凝固因子として機能するようになる。プロテインCの活性化に寄与する血管内皮上の分子としては、トロンビンを特異的に結合するトロンボモジュリン(TM)と血管内皮プロテインCレセプター(EPCR)が同定されている。TMとEPCRのノックアウトマウスはともに胎児早期に死亡してしまうために、血栓症との関連について機能することは不可能であった。そこで、これらの受容体およびプロテインCに対する機能阻止抗体を調製し、投与実験を行うことで、これらの分子が凝固制御において果たしている機能の解析を行った。まず、プロテインCに対する抗体でEPCRに対する結合を特異的に阻止する抗体を作成し、マウスに投与したところ致死的な血栓が誘導された。この抗体は活性化プロテインCの抗凝固活性には影響を与えないので、プロテインCとEPCRの結合がin vivoの凝固制御にとって必須であることが示唆された。EPCRに対する機能阻止抗体でも重篤な血栓症が誘導されたのでEPCRの機能も凝固制御に必要である。マウスTMに対する機能阻止抗体の作成にも成功し、この抗体によって重篤な血栓症の誘導が起こることも明らかになった。プロテインC経路において主要な役割を果たす、これら全てのマウス分子に対して機能阻止抗体が作成できたので、今後詳細なin vivoでの機能解析が可能になった。

研究成果

• [文献書誌] Esmon C T : "Inflammation, sepsis, and coagulation."Haematologica. 84. 254-259 (1999)
• [文献書誌] Shimazu,R: "MD-2, a molecule that confers lipopolysaccharide responsiveness on toll-like receptor 4."J.Exp.Med.. 189. 1777-1782 (1999)
• [文献書誌] Yamazaki Y: "Fibroblasts, glial, and neuronal cells are involved in extravascular prothrombin activation."J.Biochem.. 126. 655-661 (1999)
• [文献書誌] Ye X : "The endothelial cell protein C receptor (EPCR) functions as a primary receptor for protein C activation on endothelial cells in arteries, vains, and capillaries"Biochem.Biophys Res.Commun.. 259. 671-677 (1999)
• [文献書誌] Akashi S : "Regulatory roles for CD14 and phosphatidylinositol in the signaling via toll-like receptor 4-MD-2."Biochem.Biophys.Res.Commu.. 268. 172-177 (2000)
• [文献書誌] Gu JM: "Characterization and regulation of the 5'-flanking region of the murine endothelial protein C receptor gene. "J.Biol.Chem.. 275. 12481-12488 (2000)
• [文献書誌] Fukuoka M: "Anti-adhesive function of CD43 130 kDa glycoform expressed in CD4 T lymphocyte clones and in transfectant cell lines."Blood. 96. 4267-4275 (2000)
• [文献書誌] Shu F: "Activated protein C suppresses tissue factor expression on U937 cells in the endothelial protein C receptor-dependent manner."FEBS Letters. 477. 208-212 (2000)
• [文献書誌] Tsuneyoshi N: "Expression and anticoagulant function of the endothelial cell protein C receptor (EPCR) in cancer cells."Thromb.Haemostasis. 85. 356-361 (2001)