| 研究概要 |
[目的]ETにおける巨核球過増殖の原因解明のため、本症の巨核球造血が生理的なTGF-β1の抑制から逸脱しているか否か、また逸脱していればその機序をあきらかにする。
[対象と方法](1)正常人およびET患者骨髄単核球を採取。トロンボポイエチン(TPO)(100ng/mL),G-CSF(100ng/mL),エリスロポイエチン(EPO)(2U/mL)存在下にそれぞれ培養し巨核球(CFU-Meg)、顆粒球(CFU-GM)、赤芽球コロニー(BFU-E)形成数を算定する。またTGF-β(0-1.0ng/mL)を添加培養しそのコロニー形成抑制効果を検討する(2)培養day14にコロニーを回収しtotal RNAを抽出。TaqMan real time RT-PCR法でSmad2,3,4,5mRNAの発現を定量的に解析する。(3)Smad4遺伝子発現レトロウイルスベクターでフィブロネクチンを用いてET患者骨髄単核球に遺伝子導入しCFU-Megコロニー形成に対するTGF-βの抑制効果を検討する。
[結果]正常人の巨核球コロニーはTGF-β1.0ng/mL添加により完全に抑制されたがET患者の抑制率は45〜65%程度であった。CFU-GM,BFU-Eコロニー形成抑制率は正常者、ET患者ともにそれぞれ平均30%,40%であった。正常者のSmad4mRNA発現はCFU-Megで最も高く認められた。またET患者CFU-MegでのSmad4発現は正常者のそれに比較し有意に低下していた。また、ET患者骨髄単核球にSmad4遺伝子を導入するとCFU-Megコロニー形成はTGF-βにより抑制された。
[考察・結論]ET患者CFU-MegではSmad4発現低下のためTGF-βの増殖抑制から逸脱していると考えられた。またCFU-GM,BFU-Eにおいても発現低下があり幹細胞レベルでの異常と考えられた。
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